胃癌复发相关的甲基化基因芯片筛选及CNNM4基因在胃癌及肝癌细胞系中的表达

摘要

目的：通过对一年内复发和三年内未复发的胃癌患者的胃癌组织样本进行甲基化基因芯片筛选，探讨表观遗传学在胃癌复发中的作用机制，筛选出甲基化程度存在明显差异的基因，为发现用于鉴定胃癌复发的分子标志物鉴定基础。
　　方法；对手术切取得胃癌组织进行HE染色，光学显微镜下进行病理学验证。提取胃癌组织的总DNA进行质量控制。应用甲基化基因芯片技术筛选出甲基化程度存在明显差异的基因。随机筛选出某一低甲基化修饰的基因，采用qRT—PCR技术鉴定其在胃癌/肝癌细胞系与正常胃/肝细胞系中的表达差异。
　　结果：甲基化基因芯片筛选结果显示，一年内复发与三年内未复发患者的胃癌组织相比。高甲基化的基因包括：MDP1、LGALS8、PRAMEF12、SLC8A2，低甲基化的基因包括：CNNM4、DGKZ、B4GALNT2、HS3ST3B1、FGF2、AGXT、PRSS3。与正常胃细胞系GES-1相比，胃癌细胞系BGC-823 CNNM4基因的表达增加，但差异无统计学意义（p＞0.05）。与正常肝癌细胞系LO-2相比，肝癌细胞系Hep G-2 CNNM4基因的表达增加，但差异仍无统计学意义（p＞0.05）。
　　结论：筛选出11个胃癌复发相关的甲基化程度明显不同的基因，提供了基因的甲基化程度作为预测胃癌复发分子标志物的相关信息。尚不能认为CNNM4基因的低甲基化参与胃癌及肝癌的复发。

目录

中文摘要

前言

材料和方法

1临床材料

2 试剂和器材

2.1 主要试剂

2.2 主要器材

2.3 试剂配制

3 实验方法

3.1胃癌组织病理验证

3.2 胃癌组织提取总的DNA及进行质量控制

3.3 甲基化基因芯片筛选

3.4 CNNM4基因在胃癌细胞系中的表达

4 统计学分析

结果

1 胃癌组织病理切片结果

2 胃癌组织总 DNA的质控结果

3 胃癌组织总 DNA 的甲基化基因芯片筛选结果

4 胃癌及肝癌细胞细胞系的培养结果

6 CNNM4基因在胃癌细胞系中的表达

5 CNNM4 基因在肝癌细胞系中的表达

讨论