SERMs对阿尔兹海默症Aβ细胞模型神经保护作用的研究

摘要

阿尔兹海默症（Alzheimer’s disease,AD）是一种最常见的老年痴呆症，患者常常为中老年人，尤其是绝经期的妇女。随着现代社会人口结构老龄化的发展，已成为继心脏病、癌症、卒中之后第四类致死原因。目前临床上用于抗AD的药物有很多种，如谷氨酸受体拮抗剂、β淀粉样蛋白靶向药物和雌激素替代疗法等。但现存药物都是以预防和减缓病情发展为主，且有很多不良之处，如引起毒副作用。最新研究发现，AD主要发病人群为绝经后的妇女，由于绝经后女性体内雌激素发生了变化而产生影响，体内分泌的雌激素通过和受体结合产生作用，具有提高记忆力，改善认知能力的功能。但是，雌激素补充疗法最大的弊端就是用药时间长，对子宫内膜壁有刺激作用，可能导致乳腺癌。选择性雌激素受体调节剂(Selective estrogen receptor modulators,SERMs)与雌激素作用相似，通过与不同组织的雌激素受体（Estrogen receptor,ER）结合而表现出不同的作用，使其在激动中枢神经系统时并不会激动其他受体，从而减少雌激素的毒副作用。因此，SERMs成为雌激素的替代药物。基于以上理论，本课题选用 SERMs作用于体外建立的神经保护模型，检测药物的神经保护作用。本实验选用的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12，将其诱导分化成为所需的神经细胞，然后建立Aβ1-42损伤模型，检测 SERMs的代表药物他莫昔芬（TAM）的神经保护作用。本课题主要包括以下内容：
　　1、选用PC12细胞将其诱导成为神经细胞。加入诱导 PC12细胞分化的神经生长因子（Nerve growth factor,NGF）。采用的实验方法是：细胞形态学观察法、Real-time PCR、Western blot免疫印迹法。通过检测神经标志物的基因水平和蛋白表达情况，发现神经标志物UCH-L1、神经丝蛋白（NFP）和微管相关蛋白2（MAP2）的基因水平均呈现1.2-2倍的增加。微管相关蛋白2的表达量在各个浓度的NGF处理组中随着NGF剂量的增加而变化，且NGF最佳诱导分化的浓度选为50μg/L。
　　2、建立Aβ1-42神经细胞损伤模型。将诱导后的细胞给予Aβ1-42处理，造成阿尔兹海默症体外神经细胞模型，运用CCK8法检测细胞存活率和活力，倒置显微镜观察细胞凋亡前和凋亡后的生理变化，JC-1荧光法检测细胞线粒体膜势能的变化。实验结果表明，向神经细胞加入Aβ1-42进行损伤，细胞形态改变、细胞凋亡显著增加、细胞线粒体膜电位显著下降，且筛选出Aβ1-42最适损伤浓度为20μmol/L。
　　3、选用选择性雌激素受体调节剂（SERMs）的代表药物他莫昔芬（TAM）研究其对神经细胞的保护作用。通过处理Aβ1-42损伤的细胞，采用CCK8法检测细胞活力，Hoechst33258染色法观察细胞核形态变化，JC-1荧光法检测细胞线粒体膜势能变化，以及采用Western blot免疫印迹法检测Bax、Bcl-2蛋白量的表达改变。本阶段实验结果显示：雌激素类药物及TAM对Aβ1-42引起的神经元损伤具有一定的保护细胞作用。经过JC-1荧光检测法得出结论，TAM可以一定程度地阻止细胞线粒体膜势能下降，对细胞线粒体具有一定的保护作用。
　　结论：本课题已完成PC12细胞诱导分化和Aβ损伤模型的建立工作，并验证了SERMs类药物TAM具有一定的神经保护作用。

目录

声明

主要符号对照表

第1章 引言

1.1 阿尔兹海默症

1.2 阿尔兹海默症发病机制的研究进展

1.3 阿尔兹海默症的药物治疗及新药研发

1.4 SERMs的神经保护作用和作用机制

1.5 Aβ1-42损伤模型建立

1.6 细胞凋亡

1.7 本课题的研究目的及意义

第2章 PC12细胞向神经细胞的诱导分化

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3实验结果

2.4讨论

2.5小结

第3章 Aβ1-42对神经细胞凋亡和线粒体功能的影响

3.1实验材料

3.2 实验方法

3.3实验结果

3.4讨论

3.5小结

第4章 他莫昔芬对神经细胞的保护作用

4.1实验材料

4.2实验方法

4.3实验结果

4.4讨论

4.5小结

第5章 总结与展望

5.1 总结

5.2 展望

参考文献

致谢

个人简历