贵州省安顺地区蛇源裂头蚴组织结构观察及分离株的分子鉴定

摘要

目的: 观察贵州省安顺地区蛇源裂头蚴虫株的组织结构特点，对分离株进行分子鉴定及种系发育关系的分析。
　　方法: 采集安顺地区不同蛇源裂头蚴，分别作10％福尔马林及70%乙醇固定。HE染色裂头蚴，进行组织观察和图像采集，并与蛙株裂头蚴的组织结构进行对比。提取全虫 DNA，PCR扩增 ITS1和cox1基因，所得PCR扩增产物经测序鉴定后，从GenBank获取相应的基因序列，采用BLAST、Clustalx1.81生物分析软件进行多重比对序列分析，并应用软件MEGA6.0构建系统发育树（邻位连接法）。
　　结果: ①裂头蚴虫体前、后端略膨大，不分节，体表有许多环形皱褶。由于颈部较短而粗，使得前端经颈部到体段的转变区域不明显。顶端中央有一孔向内凹陷成隧道状，向后延长一定距离后形成盲端。虫体结构无体腔，体壁由皮层和皮下层组成。微毛位于皮层的外表面，遍布整个虫体。实质区有肌纤维层、皮层细胞、实质细胞、排泄系统和石灰小体等。②成功扩增出8株裂头蚴的ITS1和cox1基因序列，ITS1大小为822～863bp，cox1大小为404～415bp，与预期的基因片段大小一致。基于ITS1和cox1基因序列构建的种系发育树与所有的猬迭宫绦虫均构成同一亚群，总分支的自展值为高于50%，二者在不同的分离株之间呈现基因多态性。对8株裂头蚴ITS1和cox1序列的同源性进行比较，ITS1的同源性为70.27%～82.84%，而cox1的同源性为95.63%～99.50%，显示cox1的同源性高于ITS1。已向GenBank提交ITS1和cox1新序列各一个，获得登录号为KF990161和 KJ418421。
　　结论: ①组织结构观察和基因序列比对鉴定所取得蛇源裂头蚴为猬迭宫绦虫；②在HE染色的组织结构观察水平上，区分不同裂头蚴分离株是困难的，但却有助于裂头蚴病的诊断及防治等的后续性研究；③研究结果表明，不同蛇源裂头蚴分离株之间存在基因多态性，从总分支的自展值来看，cox1比ITS1更适合用于种内遗传多态性研究，ITS1适合做定种的分子标记。

目录

封面

目录

中文摘要

1.前言

2.材料与方法

3.结果

4.讨论

5.结论

参考文献

英文摘要

致谢

中英文对照缩略词表

声明

附录

附综述: 我国人绦虫基因多态性研究