骨髓间质干细胞静脉移植对损伤大鼠脊髓BDNF、NGF、TNF-α、IL-1β表达的影响

摘要

目的探讨骨髓间质干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的作用及可能机制。 方法1．体外分离培养rMSCs，流式细胞术(FCM)检测其表面标志。 2．运用改良Allen法制备大鼠胸10脊髓外伤性截瘫模型，假手术组12只，损伤组120只随机分为对照组和rMSCs移植组，每组有3小时、6小时、12小时、24小时、3天、7天、14天7个时相点，每个时相点6只大鼠(其中3天、7天、14天这3个时相点每组各12只大鼠)。对照组和rMSCs移植组、假手术组于损伤后10min经尾静脉分别注射磷酸盐缓冲液(PBS)lml和4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)标记rMSCs单细胞PBS悬液lml(1x106个rMSCs)。 3．移植后24小时、3天、7天、14天，应用BBB评分法评价治疗前后损伤大鼠运动功能改善状况。 4．移植后14天，应用光镜及电子显微镜观察损伤脊髓组织形态学变化；移植后3天、7天，应用荧光激发及免疫组织化学技术检测rMSCs在体内迁移、存活情况及损伤大鼠脊髓脑源性神经营养因子(brain-derivedneurotrophicfactor,BDNF)、神经生长因子(NerveGrowthFactor,NGF)、肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-a,TNF-α)、白介素-1p(interleukinl-β，IL-1β)蛋白表达变化情况。 5．移植后3小时、6小时、12小时、24小时、3天、7天、14天，应用逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测损伤大鼠脊髓BDNF、NGF、TNF-(1、IL-1pmRNA表达变化情况。 结果1．rMSCs移植组与对照组损伤大鼠的运动功能均有不同程度的恢复。rMSCs移植组损伤区脊髓结构与对照组相比，相对较完整，表现出较明显的运动功能改善(P<0．05)。 2．rMSCs移植组可见DAPI标记的细胞在损伤区及其周边区明显聚集并存活。 3．对照组和rMSCs移植组损伤脊髓IL．1B、TNF-ct、BDNF、NGF蛋白及其mRNA表达较假手术组有明显增加(p<0．05)；rMSCs移植组与对照组比较，IL．1β、TNF-et蛋白及其mRNA表达受到明显抑制(p<0．05)，而rMSCs移植组与对照组比较，BDNF、NGF蛋白及其mRNA表达增加更为明显(P<0．05)。 结论rMSCs静脉移植后在宿主体内可向损伤处脊髓迁移、存活并改变脊髓损伤区的微环境，上调损伤脊髓局部的BDNF、NGF，使TNF-a、IL-1β表达降低。这可能是减少脊髓继发性损伤，促进损伤大鼠脊髓结构修复及其运动功能恢复的机制之一。

目录

前言

一材料与方法

二结果

三讨论

四总结

参考文献

致谢

综述1间充质干细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展

综述2脊髓损伤修复的实验研究现状