同型半胱氨酸致大鼠主动脉内皮细胞损伤的相关机理探讨及叶酸、VitB、VitB的保护作用

摘要

研究同型半胱氨酸对体外培养的大鼠主动脉内皮细胞损伤的可能机理途径，观察叶酸、VitB6、VitBl：对Hcy致内皮细胞损伤的保护作用与组合方案。 方法： 1.Hcy对大鼠主动脉内皮细胞的氧化应激损伤及对一氧化氮生成利用的影响 原代培养鉴定大鼠主动脉内皮细胞，取对数生长期细胞按随机区组以2．0×104个／ml浓度接种于96孔培养板，分5个浓度(0．01、0．1、0．5、1．0、5．0)mmol／LHcy干预组，并设阴性对照组，共6组，各组8个复孔。采用重复测量设计观察不同浓度Hcy干预6h、12h、24h后，MIT法观察Hcy对内皮细胞增殖的抑制作用；分光光度比色法观察脂质过氧化指标(SOD、GSH-PX、MDA)及NO、NOS的动态变化。 2．Hcy对RAEC细胞的NF-KB、VCAM一1表达及内皮一单核细胞粘附率的影响 设5组，4个浓度(0．01、0．1、1．0、5．0)mmol／LHcy干预组，一个对照组。干预24h后，免疫细胞化学法比较各组核转录子NF-KB的表达量；RT一PCR法比较各组VCAM-lmRNA表达水平；把大鼠主动脉内皮细胞与鼠单核细胞共同培养，采用考马斯亮蓝法检测粘附的单核细胞蛋白OD值，比较各组内皮一单核细胞粘附率。 3．叶酸、VitB6、VitB12对Hcy致内皮细胞损伤的保护作用 (1)运用1．27(313)正交设计表，MTT法观察叶酸、VitB6、VitBlz对Hcy致RAEC增殖抑制的交互保护作用，并选出三个组合方案。 (2)根据正交设计结果，观察叶酸、叶酸+VitBl2、叶酸+VitB~2+VitB6三种维生素方案对1．0mmol／LHcy干预后致RAEC损伤的保护作用，即检测MTT、SOD、GSH-PX、MDA、NO、NOS、内皮一单核细胞粘附率、NF一KB及VCAM—lmRNA等指标的变化。 结果： 1．0．01～5mmol／LHcy呈时间剂量依赖关系抑制RAEC增殖，降低SOD、GSH-PX、NOS酶活性，减少NO生成，降低NO利用率，增加氧化应激产物MDA的生成量。 2．1．0mmol／LHcy干预内皮细胞24h后，免疫细胞化学分析结果表明，1．Ommol／LHcy能上调内皮细胞核转录子NF-KB蛋白的表达；干预6h后，RT一PCR结果显示，1．Ommol／LHcy能上调内皮细胞VCAM-lmRNA的表达量；1．Ommol／LHcy干预24h能促进内皮一单核细胞间的粘附。 3．正交分析结果显示，叶酸、VitB12能显著缓解Hey对RAEC增殖的抑制作用，VitB6无明显作用；VitB12与叶酸、VitB6均存在交互作用，而叶酸与VitB6无交互作用。 4．叶酸、VitB6、VitB12能明显拮抗Hcy对内皮细胞SOD、GSH-PX、NOS酶活性的抑制及生长增殖的抑制，减少氧化应激产物MBA的产生，增加N0的合成与利用率，并能抑制NF-KB、VCAM-1的表达，显著降低内皮一单核细胞的粘附率。 结论： 1．Hcy通过脂质过氧化激活核转录子NF-KB，从而上调VCAM-1的表达，促进内皮一单核细胞的粘附，可能是Hcy致动脉粥样硬化的途径之一。 2．Hcy通过抑制NOS活性、减少№的合成，上调VCAM-1的表达，促进内皮一单核细胞的粘附，可能是HCy致动脉粥样硬化的又一重要途径。 3．叶酸、VitBl。均能缓解Hcy对RAEC增殖的抑制作用，VitB6无明显作用；VitBi2与叶酸、VitB6均存在交互作用，叶酸与VitB6无交互作用。5umol／L叶酸+0．1umol／LVitB6+5nmol几VitBl2是体外保护Hcy损伤内皮的较理想组合。

目录

英汉缩略词对照表

前 言

材料方法

结 果

讨 论

结 论

参考文献

致 谢

综 述 中酸及同型半胱氨酸与心血管疾病研究进展