HSP70多肽复合物的纯化及其负载树突状细胞抗肿瘤作用的研究

摘要

目的：建立从肿瘤细胞中分离纯化热休克蛋白70(HSP70)多肽复合物的方法，探讨其负载树突状细胞(dendriticcells，DC)在体外的抗肿瘤作用。 方法：热处理人胃癌细胞SGC，制备细胞裂解液，用肝素-Sepharose柱、DEAE-Sepharose柱和ADP-Agarose柱进行序贯分离，所得的蛋白行聚丙烯酰胺凝胶电泳及Westernblot鉴定分析。Bradford法测定蛋白的得率。联合应用粒/巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)及白介素-4(IL-4)从外周血单个核细胞中培养DC，用提纯的HSP70多肽复合物负载DC，流式细胞仪检测负载前后DC表型的变化，用HSP70多肽复合物负载的DC诱导淋巴细胞产生免疫活性细胞，用MTT法检测淋巴细胞的增值及免疫活性细胞对SGC、BGC和CW-2的杀伤作用。 结果：纯化的蛋白经鉴定确为相对分子量72KD的HSP70多肽复合物，从1克湿重细胞中可获取56.36ug的HSP70多肽复合物。利用GM-CSF及IL-4可从外周血单个核细胞中获取DC，HSP70多肽复合物可促进DC的成熟，表现为DC表面分子HLA-DR、CD83、CD86表达升高。由SGC中提纯HSP70多肽复合物负载DC激活淋巴细胞产生免疫活性细胞，仅对SGC有特异性的杀伤作用，而对BGC和CW-2无特异性的杀伤作用。 结论：用上述蛋白层析法可分离出高纯度，保留肿瘤抗原信息的HSP70多肽复合物；体外经细胞因子诱导获取的DC经HSP70多肽复合物负载后，在体外可激活淋巴细胞，产生对该肿瘤细胞的特异性杀伤作用。

目录

前言

材料

实验方法

结果

讨论

结论

致谢

参考文献

综述 热休克蛋白70多肽复合物与肿瘤免疫