临床分离肺炎克雷伯菌产质粒介导AmpC酶的研究

摘要

目的： 对临床分离肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶以及耐药性进行检测，尤其是对肺炎克雷伯菌质粒介导AmpC酶的检测，了解本地区肺炎克雷伯菌中AmpC酶耐药基因型的流行情况和耐药性变化，为临床抗感染治疗以及医院感染的监测和控制提供循证医学依据。对肺炎克雷伯菌质粒介导AmpC酶检测方法进行评价分析，探讨在临床实验室中建立一种及时，准确的AmpC酶检测方法。 方法： 收集2006年09月至2007年08月我院临床分离各类标本，经法国BioMerieux VITEK2 Compact全自动细菌鉴定仪进行鉴定为肺炎克雷伯菌共137株(同一患者同类标本分离菌株不重复计入)，并同时进行MIC值测定。采用头孢西丁纸片琼脂法(K-B法)进行筛选，以及应用头孢西丁三维试验、CLSI推荐的ESBLs确证试验分别进行AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的表型检测。同时根据苯基代硼酸对AmpC酶的抑制作用采用双纸片协同增效试验检测AmpC酶。应用PCR技术检测ESBLs和AmpC酶耐药基因并对扩增产物进行测序确定其基因型。 结果： 在137株临床分离肺炎克雷伯菌中，经头孢西丁纸片琼脂扩散试验筛选，对头孢西丁不敏感的菌株共有22株(抑菌圈直径≤17mm)，阳性率为16.1％(22株/137株)；ESBLs确证试验阳性菌株共有51株，阳性率为37.2％(51株/137株)；头孢西丁三维试验阳性菌株共有11株，阳性率为8.0％(11株/137株)；双纸片抑制增效试验中，FOX和FOX/PBA纸片组合阳性菌株18株，阳性率为13.1％(18株/137株)，CTT和CTT/PBA纸片组合阳性菌株11株，阳性率为8.0％(11株/137株)。 在22株对头孢西丁不敏感的临床分离肺炎克雷伯菌中，多重PCR扩增AmpC酶基因经电泳及凝胶成像分析，扩增阳性菌株有19株，阳性率为13.9％(19株/137株)；ESBLs基因PCR扩增结果为TEM型阳性有10株，阳性率为45.5％(10株/22株)；SHV型阳性有6株，阳性率为27.3％(6株/22株)；CTX-M型有6株，阳性率为27.3％(6株/22株)。其中，有1株同时携带4种β-内酰胺酶耐药基因，有6株同时携带3种β-内酰胺酶耐药基因，有5株同时携带2种β-内酰胺酶耐药基因，携带2种及2种以上共有12株(54.5％)，而携带AmpC酶耐药基因的肺炎克雷伯菌同时携带ESBLs耐药基因达63.2％(12株/19株)。AmpC酶基因扩增产物经回收测序，其结果与GenBank数据库对比，均为DHA-1型AmpC酶。头孢西丁三维试验阳性结果与PCR结果符合率为47.4％(9株/19株)，双纸片抑制增效试验中，CTT/CTT+PBA纸片组阳性结果与PCR结果符合率为57.9％(11株/19株)；FOX/FOX+PBA纸片组阳性结果与PCR结果符合率为94.7％(18株/19株)。根据产ESBLs确认试验和头孢西丁三维试验的检测结果(见表1)，对137株肺炎克雷伯菌分成ESBLs(-)AmpC(-)、ESBLs(+)AmpC(-)、ESBLs(-)AmpC(+)和ESBLs(+)AmpC(+)4种模式。其中，对头孢唑啉、头孢曲松、安曲南、头孢他啶和头孢吡肟的耐药率，ESBLs(+)AmpC(-)和ESBLs(+)AmpC(+)模式均为100％，ESBLs(-)AmpC(+)模式分别为100％、100％、75％、75％和25％。对头孢替坦、氨苄西林/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦的耐药率，ESBLs(+)AmpC(-)模式分别为0％(0株/51株)、68.2％(30株/44株)和4.5％(2株/44株)，ESBLs(-)AmpC(+)模式分别为25.0％(1株/4株)、100％(4株/4株)和50.0％(2株/4株)，ESBLs(+)AmpC(+)模式分别为42.9％(3株/7株)、100.0％(7株/7株)和28.6％(2株/7株)。对庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星和复方新诺明的耐药率，ESBLs(+)模式分别为43.1％(22株/51株)、39.2％(20株/51株)、33.3％(17株/51株)和47.1％(24株/51株)，AmpC(+)模式分别为54.5％(6株/11株)、72.7％(8株/11株)、63.6％(7株/11株)和81.8％(9株/11株)。四种模式对亚胺培南和厄它培南的耐药率最低，均为0％. 结论： 产AmpC酶的肺炎克雷伯菌耐药谱进一步扩大，而且产酶菌常携带2种或以上的耐药基因，表现出多重耐药性，但仍对亚胺培南敏感。以苯基代硼酸抑制剂为基础的双纸片增效试验作为质粒介导AmpC酶的检测方法，尤其是FOX/FOX+PBA复合纸片值得在临床实验室推广和应用.目前，我院临床分离肺炎克雷伯菌质粒介导AmpC酶以DHA-1基因型流行为主。

目录

论文说明：英文缩略词表

声明

前言

材料与方法

1材料

2方法

结果

1肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶的表型检测

2肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶的耐药性检测结果

3肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶的基因型检测结果

4肺炎克雷伯菌AmpC酶检测方法比较结果

讨论

结论

参考文献

综述：肺炎克雷伯菌产质粒介导AmpC酶的研究进展

致谢

在学期间完成的论文