姜黄素与四氢姜黄素对实验性脂肪肝的干预作用

摘要

目的： 通过复合方式建立脂肪肝体外模型和动物模型，观察并探讨姜黄素和四氢姜黄素对体内外脂肪肝模型的干预作用。 方法： (1)采用0.8％乙醇和5μg/ml软脂酸共同作用于人正常肝细胞株LO2的复合方式在体外建立脂肪肝细胞模型，并应用MTT法筛选姜黄素及四氢姜黄素作用于肝细胞的适合浓度，经油红O染色，观察不同给药组细胞内脂滴形成情况，并检测细胞内甘油三酯(TG)水平变化。从而观察姜黄素及四氢姜黄素在体外抗脂肪肝的作用效果。 (2)通过给予高脂饲料、30％L醇灌胃、40％CCl4葵花籽油溶液皮下注射的复合方式建立小鼠脂肪肝的模型，同时给予不同剂量的姜黄素和四氢姜黄素固体分散剂，于实验第16天，取血及肝组织，计算肝指数、检测血脂：血清TG、CHO、LDL-C，肝脏内脂质：肝匀浆TG、CHO、LDL-C，以及观察肝脏病理组织形态学改变。从而观察姜黄素及四氢姜黄素固体分散剂在小鼠体内抗脂肪肝的疗效。 结果： 1. (1)通过MTT法筛选出姜黄素的作用浓度为2.5μM、5.0μM、10μM，四氢姜黄素的作用浓度为5.0μM、10μM、20μM、25μM； (2)油红O染色后，在光镜下观察发现：模型组细胞内有大量的桔红色或红色脂滴积聚，而空白对照组LO2细胞几乎未发现脂滴的存在。姜黄素及四氢姜黄素随着作用浓度的增加细胞内的脂滴逐渐减少； (3)根据油红O染色的结果，选择姜黄素10μM组及四氢姜黄素25μM给药浓度进一步通过检测细胞内TG的变化以便更客观地说明姜黄素及四氢姜黄素抗脂肪肝的作用效果，实验结果发现：模型组与空白对照组相比，细胞内TG含量显著增加(P<0.01)。与模型组相比，姜黄素10μM组及四氢姜黄素25μM组均能显著地降低细胞内TG的含量，分别下降了25.6％、41.3％(P<0.05)。 2. (1)通过给予高脂饲料、30％乙醇灌胃、40％CCl4葵花籽油溶液皮下注射的复合方式成功建立了小鼠脂肪肝的模型，与正常组相比，模型组小鼠的肝湿重、肝指数、血清TG、CHO、LDL-C以及肝匀浆TG、CHO、LDL-C均显著升高(P<0.01)。肝脏病理组织也证实其发生了弥漫性的脂肪肝病变； (2)不同剂量姜黄素固体分散剂给药组与模型组相比，随着给药剂量的增加，对于血清以及肝匀浆中TG、CHO、LDL-C的含量均有不同程度的降低，其中血清TG、CHO以及肝匀浆TG、LDL-C的差异具有统计学意义。病理组织学检查也有改善，其中姜黄素300mg/kg组的作用最为显著； (3)与模型组相比，随着四氢姜黄素固体分散剂的浓度的增加，其降低肝湿重、肝指数、血清及肝匀浆中的TG、CHO、LDL-C作用也出现剂量依赖性增强。除了肝湿重和病理组织改变外，四氢姜黄素300mg/kg组对各指标的改善均具有统计学意义。 结论： 1.姜黄素及四氢姜黄素能防治由0.8％乙醇和5μg/ml软脂酸诱导的体外脂肪肝，有效地减少细胞内脂滴的形成和甘油三酯的蓄积。 2.姜黄素及四氢姜黄素固体分散剂对由高脂饲料喂养、30％乙醇灌胃、40％CCl4葵花籽油溶液皮下注射的复合方式诱导的小鼠脂肪肝均具有一定的预防作用，且这种作用呈现出一定的剂量依赖性。

目录

论文说明：英文缩略表

声明

前 言

第一部分姜黄素与四氢姜黄素体外抗脂肪肝的实验研究

1.实验材料

2.实验方法

2.1细胞培养

2.2 MTT实验筛选姜黄素四与氢姜黄素作用浓度

2.3脂肪肝细胞模型的建立

2.4油红O染色法观察细胞内脂滴

2.5细胞内甘油三酯含量的测定

2.6统计分析

3.结果

3.1姜黄素与四氢姜黄素体外防治脂肪肝的合适作用浓度

3.2姜黄素与四氢姜黄素对L02细胞内脂滴的影响

3.3姜黄素与四氢姜黄素对L02细胞内甘油三酯含量的影响

4讨论

第二部分姜黄素与四氢姜黄素固体分散剂抗小鼠脂肪肝的实验研究

1.实验材料

2.实验方法

2.1高脂饲料的配制:

2.2动物分组、造模及给药方法

2.3实验处理方法及检测指标

2.4统计分析

3.结果

3.1姜黄素与四氢姜黄素对小鼠一般情况的影响

3.2姜黄素与四氢姜黄素对小鼠肝湿重和肝指数的影响

3.3姜黄素与四氢姜黄素对小鼠血清TG,CHO,LDL-C的影响

3.4姜黄素与四氢姜黄素对小鼠肝脏TG,CHO,LDL-C的影响

3.5姜黄素与四氢姜黄素对小鼠肝脏形态的影响

3.6姜黄素与四氢姜黄素对小鼠肝组织脂变程度的影响

4.讨论

结 论

参考文献:

致 谢

文献综述:脂肪肝模型研究进展