胚胎肝干细胞分离鉴定与移植治疗急性肝损伤裸鼠

摘要

[目的]初步探讨胚胎肝脏原始/干细胞生物学特性，及移植治疗急性肝功能损伤裸鼠的可能性与有效性。 [方法]酶消化法分离孕13.5-14.5d的BALB/C小鼠的胚胎肝脏原始/干细胞，免疫细胞化学染色、免疫荧光染色法、westernblot法及RT-PCR法鉴定AFP、Albumin、CK19、c-Met、E-cadherin等肝系和胆系标志物，CCK-8法测定细胞增殖动力，流式细胞仪测定细胞周期，糖原染色观察糖原表达情况，最后给四氯化碳(CC14)诱发的肝毒性损伤的裸鼠尾静脉注射4×105个干细胞，于注射前和注射后第1、2、4、7天取裸鼠血清，测定肝功能指标，病理切片观察肝脏组织学的改善情况。 [结果]胚胎肝脏原始细胞活性高、增殖力强，多数处于G0/G1期，具有合成糖原能力，表达多种干细胞标志Albumin，cytokeratin19(CK19)，c-Met，AFP，E-cadherin；细胞移植试验观察治疗组裸鼠在干细胞移植后肝功能指标逐渐降低，第1、2、4天均低于对照组，治疗组裸鼠肝脏组织学的病理损伤的恢复比对照组快。 [结论]酶消化法能够分离得到较多具有干细胞特点的胚胎肝脏原始/干细胞，可能具有多潜能性，并且具有一定的改善急性肝损伤裸鼠的肝功能及肝脏病理指标的作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：主要英文缩略词表

声明

前言

材料和方法

材料

1、实验动物

2、主要器材

3、主要试剂

4、试剂的配制

方法

一、胚胎肝干细胞分离与培养

二、胚胎肝干细胞鉴定

三、胚胎肝干细胞生物学特性初步研究

四、胚胎肝干细胞移植

结果

一、胚胎肝干细胞形态及生长方式

二、鉴定：

1、免疫细胞化学染色鉴定

2、免疫荧光染色鉴定

3、Westernblot蛋白免疫印迹检测Albumin结果

4、RT-PCR结果

三、基本生物学特性研究结果

1、细胞增殖动力曲线

2、流式细胞周期测定

3、透射电镜观察超微结构

4、PAS糖原染色结果

四、细胞移植试验结果

1、急性肝损伤裸鼠模型的建立

2、胚胎肝干细胞移植对肝脏病理的影响

2、对肝功能指标的影响

讨论

结论

致谢

参考文献

综述1 肝干细胞来源的研究进展

综述2 间充质干细胞的表型、免疫学特性及归巢潜能

综述3 干细胞、肿瘤干细胞与肿瘤

文章发表情况