人参皂苷Rg1通过PPARγ和NFκB调节β-分泌酶的活性减少APP酶切产物β-淀粉样蛋白的生成

摘要

阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD)是一种与年龄密切相关的神经系统变性疾病。AD特征性的神经病理改变是脑组织细胞外神经炎性斑块(Neuriteplaques，NP)和细胞内神经原纤维缠结(Neurofibrillary tangle，NFT)形成，以及神经元突触的丢失或神经元数量的减少。AD患者脑内Aβ1-40和Ap1-42水平与其认知功能明显相关。异常突变的淀粉样前体蛋白(Amyloid precursor protein，APP)直接影响了β-和γ分泌酶对APP的剪切效率和产物，与Aβ异常增加有关。大多数的APP在α分泌酶作用下通过非淀粉源途径代谢，APP在β-和γ分泌酶作用下通过淀粉源途径剪切形成Aβ。β-分泌酶是Aβ产生的限速酶，BACE1是最重要的β-分泌酶，BACE1的调节受多种因素影响，BACE1的启动子包含PPARγ、NF-κB等转录因子结合位点。 人参皂苷Rg1是人参具有代表性的单体成分。研究已经发现Rg1能显著改善多种动物模型的学习记忆能力。因此本课题观察人参皂苷Rg1能否通过影响Aβ的生成和代谢，从源头上缓解或／和减轻AD病人的神经病理改变。利用稳定表达突变型APP695的N2a细胞(N2a/APP695)，通过ELISA检测Aβ观察人参皂苷Rg1是否影响Aβ生成，然后利用RT-PCR、蛋白免疫印迹、激光共聚焦显微镜等方法探讨人参皂苷Rg1对Aβ代谢有关的β-分泌酶及其上游转录因子的活性等方面的影响。研究结果如下： 1、人参皂苷Rg1能降低N2a/APP695细胞外液Aβ1-40和Aβ1-42水平，而对APP蛋白表达水平没有明显的影响。 2、2.5μM人参皂苷Rg1作用6-12h后，N2a/APP695细胞BACE1的mRNA和蛋白水平显著降低，同时β分泌酶产物β-CTF的蛋白水平降低，相反α分泌酶产物α-CTF的蛋白水平增加。 3、人参皂苷Rg1作用后，N2a/APP695细胞PPARγ和NF-κB p65蛋白表达水平明显增加并诱导促进PPARγ和NF-κB的核转位。 以上结果提示，人参皂苷Rg1能通过激活PPARγ和NF-κB，增加与BACE1启动子相应位点的结合，从而抑制BACE1的转录和翻译，降低其对APP酶切的活性；最终减少Aβ1-40和Aβ1-42生成。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略语表

声明

前言

第一部分人参皂苷Rg1对APP酶切产物Aβ生成的影响

前言

材料和方法

结果

讨论

小结

第二部分人参皂苷Rg1调节β分泌酶活性的分子机制

前言

材料和方法

结果

1人参皂苷Rg1对N2a细胞PPARγ表达和核转位的影响

2人参皂苷Rg1对N2a细胞NF-κB p65表达和核转位的影响

3人参皂苷Rg1通过PPARγ对N2a细胞BACE1 mRNA转录的影响

4人参皂苷Rg1通过NFκB对N2a细胞BACE1 mRNA转录的影响

5人参皂苷Rg1通过PPARγ对N2a细胞BACE1蛋白表达水平的影响

6人参皂苷Rg1通过NFκ-B对N2a细胞BACE1蛋白表达水平的影响

7人参皂苷Rg1通过PPARγ对N2a细胞BACE1酶切产物水平的影响

8人参皂苷Rg1通过NF-κB对N2a细胞BACE1酶切产物水平的影响

讨论

小结

总结

参考文献

IGFBP-3与凋亡

致谢

简历及在学期间发表的第一作者论文(2004-2008)