自身免疫性心肌炎发病机制的研究

摘要

目的：
　　 建立采用EAM大鼠模型，研究与细胞免疫应答相关的免疫共刺激分子CTLA-4、CD80、CD86，以及与体液免疫相关的抗心肌肌球蛋白抗体，在EAM发生发展过程中的表达及变化，探讨EAM的发病机制。
　　 方法：
　　 雄性Lewis大鼠随机分为两组：(1)实验组(40只)，于实验第1d、第8d分别在大鼠左右后肢足垫皮下注射猪心肌球蛋白和FA混合乳化液各0.1ml，合计猪心肌球蛋白2mg，制备EAM模型，并按初次免疫后第14d、28d、42d、56d不同时间段分成相应亚组；(2)正常对照组(20只)，用生理盐水代替猪心肌球蛋白进行注射。于初次免疫后第28、56d对两组大鼠进行心脏超声检测，第14、28、42、56d取各组心脏组织行HE染色观察心肌的病理变化，用免疫组化染色法检测各组大鼠心脏组织CTLA-4、CD80、CD86蛋白的表达，实时荧光定量PCR技术检测心脏心肌CTLA-4、CD80、CD86mRNA的表达水平，ELISA方法测定血清抗心肌肌球蛋白抗体水平。
　　 结果：
　　 1、模型制备情况：实验组，死亡5只，建模成功40只。正常对照组，全部存活。
　　 2、超声心动图检测：实验组与正常对照组相比，初次免疫后第28d，LVEDD、LVESD明显增加(P＜0.05)、LVEF明显降低(P＜0.05)，并探及心包积液。第56d，LVEDD、LVESD、IVST、LVPWT明显增加(P＜0.05)、FS、LVEF明显降低(P＜0.05)。心包积液消失，室壁运动减低，心腔扩大。
　　 3、心肌组织病理改变：HE染色见正常对照组心肌细胞排列均匀整齐，横纹清楚，细胞大小均一，心肌细胞间隙无变化；实验组大鼠于初次免疫后第14d，开始出现心肌炎改变，表现为组织炎性细胞浸润，伴有心肌细胞肥大变性，相邻细胞间隙增大，排列紊乱，核大深染、异型。第42d，心肌及间质炎性细胞浸润减少，第56d，炎性细胞浸润基本消失，部分心肌细胞断裂，成纤维细胞增生明显。
　　 4、免疫组化染色：结果示CTLA-4、CD80、CD86蛋白主要表达于心肌细胞间隙中或心脏包膜下结缔组织区域。实验组各不同时间组的表达均高于正常对照组(P＜0.05)，其中初次免疫的第14至28d表达呈逐渐增强趋势，而第42至56d表达逐渐减弱(P＜0.05)。
　　 5、心室心肌CTLA-4、CD80、CD86的mRNA表达：实验组心脏组织CD80、CD86的mRNA表达水平比正常对照组明显增加(P＜0.05)，并且初次免疫后的第14、28d的表达水平高于第42、56d(P＜0.05)。并且28d组CD80、CD86、CTLA-4mRNA表达水平明显增高，与心脏功能下降水平正相关。
　　 6、血清抗心肌肌球蛋白抗体检测：实验组抗体水平明显高于正常对照组(P＜0.05)，并随病程进展逐步升高，于第42d后开始下降。
　　 结论：
　　 1、用猪心肌球蛋白免疫大鼠，能制备出EAM模型。
　　 2、免疫共刺激分子CD80、CD86、CTLA-4及其mRNA表达，以及抗心肌肌球蛋白抗体的表达增加促进了心脏组织的炎症反应，与实验性自身免疫性心肌炎的发生发展密切相关。

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综述：扩张型心肌病的免疫治疗

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