胚胎干细胞修复受损子宫内膜的实验研究

摘要

子宫内膜修复障碍与许多临床问题有关，这些疾病的临床上处理十分棘手。近年来有学者提出大胆假设，认为子宫内膜的生理性再生修复是由存在于子宫内膜基底层的干细胞始发的。可以进一步假设：子宫内膜修复障碍可能由于局部干细胞枯竭或功能障碍导致。由此推测：加入外源胚胎干细胞可能有助于子宫内膜修复。
　　目的：了解同种异体胚胎干细胞是否有助于急性子宫腔损伤模型小鼠的子宫损伤修复，移植后胚胎干细胞能否定植于子宫内膜及存在时间；胚胎干细胞能否在受损宫腔内膜修复过程中被诱导分化；以及胚胎干细胞的成瘤性。
　　方法：复苏带有eGFP基因的小鼠胚胎干细胞（ESC），用小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）做饲养层培养并肾被膜下移植鉴定其全能性。将ESC移植到内膜损伤模型鼠体内，试验分三组：第一组ESC移植入单侧内膜损伤模型鼠双侧宫腔；二组，尾静脉注射ESC到单侧内膜损伤模型鼠体内。第三组用小鼠子宫内膜细胞与ESC共培养，将混合细胞移植入双侧内膜损伤模型鼠单侧宫腔，另一侧宫腔移植等量PBS；各组分别在1W、2W、3W、4W处死小鼠，荧光显微镜直接观察和HE染色、免疫组化GFP鉴定，观察ESC在内膜损伤鼠宫腔定植迁徙情况及成瘤性和ESC在小鼠体内定植情况及损伤对ESC定植的影响。
　　结果：ESC在MEF饲养层上生长状态良好，且可维持未分化状态，荧光显微镜下可见绿色荧光克隆；ESC肾被膜下注射后，可形成畸胎瘤，荧光显微镜下可见瘤体发绿色荧光，HE染色及免疫组化鉴定可见三胚层分化；子宫内膜细胞与ESC共培养后，胚胎干细胞呈扁平状克隆样生长，荧光显微镜下见绿色荧光；ESC内膜损伤鼠宫腔内移植后不同时间处死小鼠，体式荧光显微镜下观察可见损伤侧宫腔见绿色荧光，未损伤侧宫腔无荧光，子宫内膜比PBS对照侧较厚且腺体较丰富；且随时间的延长，ESC可在宫腔内形成畸胎瘤，荧光镜下见绿色荧光；ESC内膜损伤鼠尾静脉注射后处死小鼠，荧光显微镜下可见腹壁切口，损伤侧子宫见绿色荧光，未损伤侧宫腔未见荧光；ESC与子宫内膜共培养后移植，可见移植侧宫腔内见绿色荧光，在观察期内未见肿瘤生长；荧光组织取材后固定，GFP免疫组化鉴定，可见ESC损伤宫腔内移植后，形成的肿瘤组织可见向脂肪、软骨、腺体、神经等组织分化，GFP阳性；共培养ESC移植后宫腔修复良好，可见完整子宫内膜上皮及腺体，GFP染色阳性；尾静脉ESC注射后，子宫修复亦好，GFP染色细胞呈巢状分布于子宫内膜；共培养ESC移植后宫腔修复良好，可见完整子宫内膜上皮及腺体，GFP染色阳性。
　　结论：ESC可以在内膜损伤鼠宫腔内定植，并可成瘤；损伤对ESC在小鼠体内迁徙有重要作用。ESC与子宫内膜细胞共培养后再植入子宫内膜损伤鼠宫腔，可在宫腔内定植，并且成瘤性降低。

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前言

材料与方法

一、实验材料

二、实验方法

第一部分：ESC体外培养、小鼠子宫内膜细胞培养、小鼠子宫内膜细胞与ESC共培养

第二部分：子宫内膜损伤模型鼠制备

第三部分：ESC移植入内膜损伤模型鼠

第四部分：组织病理及e GF P免疫组化鉴定

结果

1. 小鼠ES C体外培养与鉴定

5.单侧宫腔损伤，双侧ES C移植荧光显微镜观察

6.单侧宫腔损伤，尾静脉ES C注射

7.双侧宫腔损伤，单侧共培养细胞移植，另侧等量PBS移植

8.GFP免疫组化结果

讨论

一、ES C移植

二、共培养胚胎干细胞移植

结论

参考文献

综述

参考文献

致谢