巴戟天粗提取物对微波辐射后雄性大鼠下丘脑调控生精功能的影响

摘要

【目的】：
　　通过微波辐射构建雄性SD大鼠生殖系统损伤模型,观察不同巴戟天粗提取物对生殖系统的功效及对下丘脑调控大鼠生精功能的影响,为以后巴戟天有效成分的筛选及单体的研究提供依据。
　　【方法】：
　　75只健康成年雄性SD大鼠首先随机分为空白对照组(5只)、实验对照组(35只)和辐射组(35只)。辐射组应用微波信号发生器(900MHz1.0W),功率密度为218μm/cm2,12h/d,持续辐射2周。实验对照组生活环境与辐射组相同但不辐射。辐射后,每组各取材5只。随之,辐射组随机分成辐射模型组、巴戟天水提物治疗组和巴戟天醇提物治疗组,每组10只。实验对照组也随机平均分成对照组、未辐射巴戟天水提物给药组和未辐射巴戟天醇提物给药组。巴戟天给药组和治疗组分别给予相应的巴戟天提取物20g/kg.d-1持续灌胃2周。观察各组大鼠生长发育和神经行为学变化,相关的性行为、精子参数及血清激素水平差异,睾丸和附睾指数及形态学改变,下丘脑形态学及下丘脑弓状核和正中隆起GnRH-mRNA的表达。
　　【结果】：
　　1.微波辐射后,辐射组大鼠体重(255±27)g略低于实验对照组(265±20)g,但差异无统计学意义。辐射组大鼠体毛发黄、干燥、无光泽,特别是近尾部1/3处显著。以上改变为渐进过程即随辐射时间的延长逐渐加重。大鼠在辐射过程中神经行为学上表现为昼睡夜醒、行动敏捷、防御攻击能力强→躁动不安,易激惹。巴戟天提取物灌胃治疗后大鼠增重显著低于对照组,但体毛恢复光泽,躁动减轻,变得相对安静嗜睡。巴戟天水提物治疗组较巴戟天醇提物治疗组体表特征恢复快且明显。巴戟天水提物给药组和巴戟天醇提物给药组在灌胃过程中体重略低于对照组外,大鼠体毛及精神状态无明显改变。
　　2.与实验对照组相比,辐射组大鼠扑捉潜伏期(CIP)显著延长(P<0.05),扑捉次数(CT)显著减少(P<0.05)。
　　3.与其他组相比(巴戟天醇提物治疗组除外),辐射模型组睾丸和附睾指数均显著降低(P<0.05)。
　　4.睾丸和附睾形态学
　　光学显微镜观察发现,对照组睾丸生精上皮细胞排列整齐,各级生精细胞层次分布明显,生精小管和附睾管内均可见大量精子。辐射模型组睾丸生精小管上皮损伤,结构疏松,生精细胞排列紊乱,脱落、坏死,有的生精小管管腔内充满坏死脱落的生精细胞及细胞碎片,有的管腔空虚,生精小管内见少量精子或未见精子,生精小管间有时可见游离的红细胞,少量间质细胞散在分布。辐射模型组大鼠附睾管内可见三种现象:①附睾管内充满脱落的细胞及细胞碎片,②附睾管内除见脱落的细胞及细胞碎片外,还可见少量精子,③附睾管内空虚。巴戟天水提物治疗组表现为睾丸生精小管细胞层次增多,脱落细胞及细胞碎片少见,新生精子(即由基底部伸向管腔内的精子)增多,大部分附睾管内均充满精子,偶见1~2个空虚管腔。巴戟天醇提物治疗组睾丸仍可见多数生精小管内生精细胞坏死脱落,精子少见,附睾管内脱落细胞及细胞碎片稀疏分布,空虚官腔仍可见。
　　透射显微镜观察发现,对照组生精细胞排列紧密,可见大量精子,辐射模型组睾丸可见大片坏死区域,支持细胞及生精细胞内线粒体肿胀、空泡化,细胞核分裂异常呈中央空虚的环状并可见细胞核溶解,可见极少量的精子,巴戟天水提物治疗组睾丸生精小管内精子显著增多,巴戟天醇提物治疗组生精细胞恢复显著但仅见少量精子。
　　5.与其他组相比(醇提物治疗组除外),辐射模型组精子密度显著降低(P<0.05),精子畸形率显著升高(P<0.05)。
　　6.与对照组相比辐射模型组血清睾酮(T)水平降低,GnRH及LH水平升高,醇提物治疗组GnRH、FSH、LH、T水平与辐射模型组相比无显著差异。
　　7.下丘脑形态学
　　透射显微镜观察发现辐射模型组下丘脑神经元内线粒体肿胀、空泡化,内质网扩张,可见有髓神经纤维脱髓鞘样变,突起肿胀。巴戟天水提物治疗组和巴戟天醇提物治疗组均有所恢复。
　　8.免疫组化及免疫荧光技术标记可见GnRH主要表达在弓状核,辐射模型组表达增强。
　　9.Real-timePCR结果显示,辐射模型组下丘脑GnRH-mRNA表达水平增高。
　　【结论】：
　　1、通过低功率微波持续辐射2周可成功构建成年雄性SD大鼠生殖系统损伤模型。
　　2、巴戟天水提物可促进微波辐射大鼠睾丸的修复和促进精子生成,巴戟天醇提物可改善损伤的大鼠睾丸生精细胞的形态,而对精子的生成作用不明显。
　　3、微波辐射对下丘脑有一定的损伤影响,巴戟天用药后下丘脑GnRH的表达降低。
　　4、巴戟天水提物治疗效果优于巴戟天醇提物。

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前言

第一部分 微波辐射雄性生殖系统损伤动物模型的构建

引言

材料与方法

结果

讨论

结论

第二部分 不同巴戟天提取物对微波辐射后大鼠生殖系统的影响

引言

材料与方法

结果

讨论

结论

第三部分 巴戟天粗提取物对微波辐射后下丘脑GnRH表的的影响

引言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

致谢

综述1

综述2