脂氧素A4在金黄地鼠口腔粘膜溃疡愈合中的作用研究

摘要

目的:脂氧素A4(LipoxinA4,LXA4)是花生四烯酸代谢产物,具有抗炎和促进炎症消退的作用。本课题通过研究脂氧素A4及相关炎症因子在金黄地鼠口腔粘膜溃疡病灶中的表达,以及不同浓度LXA4类似物15-epi-LXA4局部应用对金黄地鼠口腔粘膜溃疡愈合的影响,探讨LXA4对溃疡愈合的可能作用机制,为LXA4应用于口腔粘膜迁延不愈的炎症类疾病提供实验基础。
　　方法:(1)20只金黄地鼠分为A、B、C、D四组,每组5只。以“自由基损伤法”建立实验组金黄地鼠(A、B、C组)左颊囊口腔粘膜溃疡模型,观察其一般情况及溃疡灶变化,分别于建模后第3、6、10天处死A、B、C组动物,D组(对照组)不做任何干预,于第10天处死。以上动物处死后均切取病灶组织,做HE染色、NF-κBp65免疫组化染色及制备组织匀浆ELISA法测定LXA4、PGE2浓度。(2)30只金黄地鼠随机分为LXA4治疗组和空白对照组,每组各15只;每组动物再随机分为A、B、C三个批次,每批次5只。LXA4治疗组中的动物,左颊粘膜作为低浓度LXA4治疗组,右颊粘膜作为高浓度LXA4治疗组;取对照组动物左颊粘膜为正常对照。以“自由基损伤法”于LXA4治疗组金黄地鼠左、右颊囊粘膜分别建立溃疡模型,从建模后第1天起每日以不同浓度15-epi-LXA4溶液注射于溃疡灶(左颊1nmol/L,右颊10nmol/L,各40μl,一日两次)并观察其一般情况及溃疡灶变化;对照组A、B、C批次动物不做任何干预。LXA4治疗组和对照组A、B、C三批次动物分别于建模后第3、6、10天处死。以上动物处死后均切取病灶组织,做HE染色、NF-κBp65免疫组化染色及制备组织匀浆ELISA法测定LXA4、PGE2浓度。以SPSS17.0对结果进行统计学分析。
　　结果:(1)以“自由基损伤法”建立的金黄地鼠口腔粘膜溃疡在建模后第3天出现典型的溃疡,第6天溃疡灶出现修复迹象,第10天时溃疡基本愈合;NF-κBp65免疫组化阳性率第3天组(11.25±3.28％)、第6天组(24.92±2.97%)、第10天组(4.72±3.17%)均明显高于对照组(1.74±0.21%,P<0.05),而第3天组、第6天组、第10天组间无明显差异(P>0.05);LXA4浓度和PGE2浓度在第3天、第6天和第10天组间无显著差异(P>0.05),但均明显高于对照组(P<0.05);经Pearson相关分析,LXA4浓度、PGE2浓度、NF-κBp65免疫组化评分呈正相关(P<0.05)。(2)以不同浓度15-epi-LXA4局部治疗后,高浓度治疗组较之低浓度治疗组炎症反应轻、修复反应出现早,溃疡愈合数量多。高、低浓度治疗组NF-κBp65阳性染色率、LXA4、PGE2浓度在溃疡愈合进程中均随溃疡的愈合不同程度下降。低浓度组NF-κBp65阳性染色率、PGE2浓度和LXA4浓度均高于同批次高浓度治疗组(P<0.05),高浓度治疗组在第10天时阳性染色率、LXA4浓度已显著下降,与对照组无明显差异(P>0.05)。NF-κBp65、PGE2、LXA4在溃疡愈合的过程中呈协同变化。
　　结论:“自由基损伤法”建立金黄地鼠口腔溃疡模型稳定、可靠。本研究观察了脂氧素A4及NF-κBp65、PGE2在口腔溃疡的病程中的表达规律,提示口腔粘膜溃疡的“自限性”愈合可能与LXA4、PGE2抑制NF-κB所介导的炎症级联反应相关。局部粘膜下注射LXA4类似物,对金黄地鼠口腔黏膜溃疡愈合起促进作用且LXA4对溃疡愈合的促进作用呈浓度依赖性,可以将其作为治疗口腔粘膜迁延不愈炎症性疾病的新策略。

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前言

第一部分 脂氧素A4及相关炎症因子在金黄地鼠口腔粘膜溃疡病灶中的表达

材料与方法

1.主要实验材料

2.方法

3 统计学分析

结果

1.大体观察

2.HE染色

3. NF-κB p65免疫组化染色

4. ELISA法测定PGE2、LXA4浓度

讨论

小结

第二部分 不同浓度脂氧素A4对金黄地鼠口腔粘膜溃疡愈合的影响

材料与方法

1.实验材料

2.方法

3.统计学分析

结果

1.肉眼观察

2.HE染色

3.NF-κB p65免疫组化染色

4.ELISA结果

5.相关性分析

讨论

一、LXA4抑制炎症细胞浸润

二、LXA4促进上皮细胞增殖

三、LXA4抑制PGE2合成

五、LXA4抑制NF-κB活化

六、LXA4具有抗氧化作用

七、LXA4的免疫调节作用

小结

结论

参考文献

综述

致谢