AQP5在手汗症合并腋窝多汗患者腋窝汗腺的表达定位及人汗腺细胞体外模型的实验研究

摘要

目的:
　　检测多汗症患者腋窝汗腺水通道蛋白5(aquaporin5,AQP5)的表达与定位,并通过建立人体汗腺细胞体外模型的实验研究,探讨其与多汗症发病机制的关系。
　　方法:
　　收集手汗症合并腋窝中重度多汗患者(实验组)及非多汗患者(对照组)腋窝皮肤及血清标本,HE染色及透射电镜观察两组间形态学差异,并电镜下计数汗腺细胞分泌颗粒,免疫组化、荧光定量PCR及Western-blot法检测AQP5表达。
　　酶消化法培养两组汗腺细胞,通过细胞免疫化学法鉴定细胞,并比较两组细胞生长趋势及AP5表达;Elisa法检测两组血清乙酰胆碱浓度,并按照测得两组浓度配制培养液进行细胞培养,通过免疫荧光法及Western-blot法检测汗腺细胞AQP5表达。
　　结果:
　　两组间在病理形态学及超微结构上未见明显差异;实验组细胞分泌颗粒显著高于对照组,且AQP5mRNA及蛋白表达量显著高于对照组;培养的汗腺细胞抗-CK7,抗-CK19染色阳性,抗-Actin染色阴性,两组细胞生长趋势接近;实验组AQP5mRNA表达量高于对照组(P<0.05),而蛋白表达无明显差异(P>0.05);
　　实验组外周血乙酰胆碱浓度高于对照组(P<0.05);按照测得浓度配制培养液培养汗腺细胞,6h后高浓度培养液汗腺细胞AQP5表达强度明显高于低浓度组(P<0.05)。
　　结论:
　　手汗症合并腋窝多汗者腋窝汗腺与非多汗症者相比在形态学上无差异,但分泌颗粒增多,AQP5mRNA及蛋白表达增强,且外周血乙酰胆碱浓度升高,表明神经递质(乙酰胆碱)过度释放及AQP5的过表达可能同多汗症发病机制相关;
　　体外培养腋窝多汗者汗腺细胞AQP5mRNA表达水平高于非多汗者,而蛋白表达无明显差异,乙酰胆碱刺激后两组体外培养的细胞AQP5表达均明显增强,且高浓度组表达高于低浓度组,其提示手汗症合并腋窝多汗者汗腺AQP5蛋白表达增强可能与神经体液调节有关。

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缩略词简表

第一部分AQP5在手汗症合并腋窝多汗患者腋窝汗腺的表达定位及人汗腺上皮细胞体外模型的构建

第一章 前 言

第二章 实 验 内 容

2.1 汗腺一般形态与超微结构检测

2.2 AQP5及AQP5mRNA在腋窝汗腺的表达

第三章 结 果

3.1 临床资料

3.2 汗腺一般形态比较与超微结构检测

3.3 免疫组化法检测AQP5在汗腺中的表达定位

3.4 腋窝皮肤AQP5mRNA表达及相对表达水平的差异

3.5 Western-blot检测AQP5在两组间汗腺中的表达水平差异

3.6 腋窝皮肤汗腺体外原代培养及鉴定结果

3.7 Real-Time PCR检测汗腺上皮细胞AQP5mRNA的表达

3.8 Western-blot检测AQP5在两组间汗腺细胞中的表达水平差异

第四章 讨 论

4.1人体汗腺组织形态学

4.2 汗腺的功能

4.3水通道蛋白与水通道蛋白5

4.4 多汗症与原发性手汗症

4.5体外培养汗腺上皮细胞与AQP5表达关系的研究

第五章 结 论

参 考 文 献

第二部分 多汗症发病机制的探索性实验研究

引言

第一章 实验内容

1 材料

2 实验方法

3 统计学处理

第二章 结果

2.1乙酰胆碱浓度测定

2.2 细胞免疫荧光结果

2.3 AQP5蛋白定量结果

第三章 讨论

第四章 结论

参考文献：

致谢

综述