TRPC6在SHR左室肥厚中的作用——TRPC6与BNP关系的研究

摘要

第一部分：目的:研究自发性高血压大鼠(SHR)肥厚心肌中TRPC6与脑钠肽(Brain natriuretic peptide,BNP)及其受体(A-type natriuretic peptide receptor,NPR-A)表达的关系,探讨高血压心肌肥厚发生的可能机制。
　　方法:以18周龄的雄性SPF级SHR作为实验组(n=10),而相同周龄的雄性京都威斯特大鼠(WKY)为对照组(n=10)。①检测大鼠收缩压(SBP);②测定左室质量(LVM)并计算左室质量指数(LVMI);③心肌胶原容积分数(CVF)、心肌内血管周围胶原面积(PVCA)用天狼星红染色评估;④左心室TRPC6、BNP及NPR-A蛋白表达用免疫组化及Westernblot检测。
　　结果:①SHR组的SBP、LVM、LVMI、PVCA、CVF分别比WKY组明显增高(P<0.05);②SHR组的TRPC6和BNP蛋白表达明显高于WKY组(P<0.05),而NPR-A表达较WKY组明显降低(P<0.05)。
　　结论:SHR左室肥厚可能与TRPC6、BNP的上调和NPR-A下调有关。
　　第二部分：目的:研究TRPC6在培养的SHRCFs增殖中的作用及BNP对CFs增殖及TRPC6表达的影响变化,探讨高血压心肌成纤维细胞异常增殖的分子机制。
　　方法:取18周雄性SHR和WKY心肌成纤维细胞(CFs)进行培养,第三代细胞用于实验,以同步测定细胞WST-1代谢活性及Brd-UELISA评估细胞增殖,Westernblot检测TRPC6、BNP及其受体NPR-A蛋白的表达。以不同浓度的AngII(0、10-8、10-7、10-6mol/L)诱导CFs增殖及其TRPC6表达,取作用最强的AngII浓度(10-6mol/L)用于实验。SHR来源的CFs为实验组并进行如下分组:①空白对照组;②AngII组;③AngII+SKF96365组;④AngII+BTP2组;⑤AngII+BNP组;并设WKY来源的CFs为对照组:①空白对照组;②AngII组;③AngII+BNP组。
　　结果:①AngII呈剂量依赖性诱导培养的SHRCFs的增殖,并上调TRPC6蛋白的表达;TRPC抑制剂SKF96365、BTP2明显抑制AngII诱导的SHRCFs增殖(P<0.05),并下调TRPC6蛋白表达(P<0.05);②SHR来源的CFs在相同浓度(10-6mol/L)的AngII作用下,其增殖及TRPC6表达,明显高于WKY组(P<0.05);③BNP能抑制AngII诱导的WKY来源的CFs增殖及TRPC6的上调(P<0.05),但相同浓度的BNP对SHR来源的CFs的增殖及TRPC6表达无明显影响(P>0.05);④SHR空白对照组BNP表达与WKY空白对照组比较无明显改变(P>0.05),而NPRA表达则显著降低(P<0.05)。
　　结论:①TPRC6在SHR心肌成纤维细胞的增殖中起重要作用;②BNP能下调WKY心肌成纤维细胞TRPC6的表达并抑制其增殖,而对SHR无类似作用,其机制可能是SHR心肌成纤维细胞NPR-A受体下调。

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前言

第一部分 SHR左室肥厚TRPC6与脑钠肽系统表达的关系研究

材料与方法

1实验动物

2 实验材料

3方法

4 统计处理

结果

1血压及左室肥厚指数

2 HE染色

3 心肌胶原的变化

4 大鼠左心室TRPC6、BNP、NPR-A蛋白表达

讨论

1 SHR左室形态学改变

2 TRPC6在SHR肥厚心肌中的表达变化及意义

3 BNP及其受体NPR-A在SHR肥厚心肌中的表达变化及意义

4 TRPC6与BNP及其受体NPR-A在SHR肥厚心肌中表达的关系

小结

第二部分TRPC6在心肌成纤维细胞增殖中的作用----BNP的干预实验

引言

材料与方法

1 实验动物（详见第一部分）

2 实验材料

3 研究方法

4 统计处理

结果

1 心肌成纤维细胞的识别与鉴定

2 TRPC6在心肌成纤维细胞增殖中的作用

3 BNP对心肌纤维细胞增殖和TRPC6表达的影响

讨论

1 TRPC6在AngII诱导的心肌成纤维细胞增殖中起重要作用

2 BNP对SHR心肌成纤维细胞增殖及TRPC6表达的影响

3 研究局限性

小结

总结

参考文献

致谢