抑制PLC-γ1能促进人骨性关节炎软骨细胞外基质的合成

摘要

目的：旨在探讨磷脂酶C-γ1（phospholipase C-γ1）在人骨性关节炎(osteoarthritis,OA)疾病发展过程中的作用。
　　方法：本研究通过从手术废弃材料中获得正常膝关节及骨关节炎患者软骨，分离出软骨细胞，并进行细胞培养，应用蛋白免疫印迹（western blotting）技术，检测正常与OA软骨细胞中plc-γ1、磷酸化plcγ1及其下游分子（sox-9、mmp13)的差异；免疫组化方法检测plcγ1在OA与正常对照组之间表达差异；加入U73122（plcγ1抑制剂），检测下游分子（sox-9 mmp13 Agg Col II）表达变化；设计并合成针对plcγ1的siRNA序列，转染人OA软骨细胞，干扰plcγ1的表达；最后使用DAG和IP3相应的抑制剂处理细胞，用western blotting技术检测这些信号通路蛋白的表达水平。
　　结果：plcγ1在骨性关节炎患者的软骨组织及软骨细胞中的表达高于相应的正常对照组。Plcγ1与OA患者软骨细胞外基质合成密切相关，进一步应用U73122（plcγ1抑制剂）或者siRNA技术降低plcγ1，均能促进OA患者软骨细胞外基质的合成；并且在调节基质合成中，plcγ1下游的 IP3/Ca2+/CamK信号轴强于DAG/PKCδ轴，其可通过激活mTOR/P70S6K/S6，进而参与软骨细胞外基质的合成。
　　结论：plcγ1参与了OA患者软骨细胞外基质的合成，而且plcγ1水平的降低能够促进软骨细胞外基质合成，plcγ1可以成为骨关节炎的一种新的治疗靶点。

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第1章引 言

1.1 骨性关节炎的发病机制

1.2 磷脂酶C

1.3 课题研究目标内容及意义

第2章 实验材料

2.1 细胞系

2.2 主要细胞培养及培养试剂

2.3 工具酶和抗体

2.4 主要化学试剂和耗材

2.5 主要仪器

2.6 主要溶液配制

第3章 实验方法

3.1 人软骨细胞分离与培养

3.2 细胞免疫组化（按试剂盒说明书进行操作）

3.3 组织切片标本固定、脱钙、脱水、包埋、切片

3 . 4 组织切片免疫组织化学（IHC）染色[13]

3.5 免疫组化阳性细胞的观察与分析

3 . 6 总蛋白测定（BCA法）

3.7 Western Blotting检测蛋白表达

3.8 统计学方法

第4章结果与分析

4.1 PLC-γ1在OA患者软骨及软骨细胞中表达升高

4 . 2 软骨细胞外基质的合成一定程度上依赖于PLC-γ1的激活

4.3 PLC-γ1通过PLC-γ1/IP3/Ca2+/Camk信号通路轴激活mTOR/P70S6P/S6，从而实现对细胞外基质合成的调控

第5章 讨 论

致谢

综述

1 plcγ1的主要结构

2 plcγ1的活化

3 plc与肿瘤

4 plc与其它疾病

参考文献