核受体RXR/VDR激动剂对STZ-ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的影响及可能机制

摘要

目的：观察核受体RXR激动剂蓓萨罗汀、VDR激动剂骨化三醇对链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)诱导的糖尿病ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的影响，并探讨其可能机制。
　　方法：70只雄性小鼠（10只C57BL/6，60只Apo E-/-），50只ApoE-/-小鼠经链脲佐菌素（STZ）腹腔注射造糖尿病模型后，随机分组: C57组，ApoE-/-组， STZ-ApoE-/-(DM)组，STZ-Apo E-/-+bex组(bexarotene:10mg/k g/d)，STZ-ApoE-/-+cal组(calcitriol:200ng/只，2次/周)，STZ-ApoE-/-+bex(bexarotene:10mg/kg/d)+cal组(calcitriol:200ng/只，2次/周)。灌胃给药12周。HE染色观察小鼠胸主动脉斑块的面积；RT-PCR法测小鼠心脏组织gp91、NF-κB、VDR、RXRα的mRNA水平；Western blot法测小鼠胸主动脉gp91、NF-κB、VDR、RXRα的蛋白表达；免疫组化法测小鼠胸主动脉gp91、NF-κB的分布情况；化学法测小鼠体内MDA、SOD；Elisa法检测小鼠体内炎症指标IL-6、IL-10。
　　结果：1）STZ诱导的糖尿病ApoE-/-小鼠体内血糖及血清TC和LDL-C水平、小鼠胸主动脉斑块面积及体内gp91、MDA、SOD、NF-κB P65、炎症因子IL-6水平均显著增加（P<0.05）。2）蓓萨罗汀和骨化三醇对STZ-ApoE-/-小鼠血糖及血脂水平无影响，但可减少其胸主动脉斑块面积及体内gp91、NF-κB P65及IL-6水平；蓓萨罗汀还可升高HDL，降低MDA；联合用药则gp91、MDA、NF-κB P65、IL-6水平降低更显著，同时可升高SOD活性（P<0.05）STZ诱导的糖尿病ApoE-/-小鼠体内RXRα、VDR的mRNA及蛋白水平均减少（P<0.05）。骨化三醇和联合用药均可显著上调VDR mRNA及蛋白水平；蓓萨罗汀可上调 RXRα的mRNA及蛋白水平，骨化三醇抑制RXRαmRNA及蛋白水平（P<0.05）。与Cal组相比，联合用药可上调RXRαmRNA及蛋白表达水平（P<0.05）。
　　结论：RXR激动剂蓓萨罗汀、VDR激动剂骨化三醇可减少STZ-ApoE-/-小鼠胸主动脉斑块面积，联合用药有协同作用。可能与蓓萨罗汀、骨化三醇通过核受体RXR、VDR的基因调控，抑制NADPH氧化酶、NF-κB的激活及炎症反应的发生有关。

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前言

材料和方法

1材料

1.1 小鼠

1.2 主要试剂和试剂盒

1.3 实验所用缓冲液及其他溶液

1.4 主要仪器和耗材

2方法

2.1 小鼠的喂养

2.2总RNA的提取及RT-PCR

2.3 Western Blotting

2.4 HE染色（苏木素－伊红染色，He matoxylin-Eos in Staining）操作步骤

2.5 免疫组织化学法的操作步骤

2.6 ELISA试剂盒检测STZ-ApoE-/-小鼠体内IL-6、IL-10水平

2.7 TBA法测定MDA的含量

2.8 黄嘌呤氧化酶法测定SOD的活性

2.9 统计学方法

结果

1.1 各组小鼠血糖的比较

1.2 各组小鼠血脂的比较

1.3 蓓萨罗汀、骨化三醇对STZ-ApoE-/-小鼠胸主动脉斑块面积的影响

1.4 蓓萨罗汀、骨化三醇对STZ-ApoE-/-小鼠体内氧化应激反应因子MDA、SOD、gp91的影响

1.5 蓓萨罗汀、骨化三醇对STZ-ApoE-/-小鼠体内NF-κB P65的影响

1.6 蓓萨罗汀、骨化三醇对STZ-ApoE-/-小鼠血清炎症反应因子IL-6、IL-10的影响

1.7 各组小鼠体内RXRα、VDR的测定

讨论

结论

参考文献

致谢

综述