X线诱导结直肠癌SW480细胞上皮间质转化及其信号传导通路的相关研究

摘要

目的：
　　1.检测X线照射对结直肠癌SW480细胞上皮间质转化的影响。
　　2.检测X线照射后结直肠癌SW480细胞可能的上皮间质转化相关信号传导通路中间关键分子的变化，探讨X线照射诱导结直肠癌细胞发生上皮间质转化可能的信号传导通路。
　　方法：
　　1.将人结直肠癌SW480细胞分为5组，分别用0、2、4、6、8Gy剂量的X线照射后培养48h。
　　2.应用Western blot检测X线照射后各组的间质化指标Vimentin的蛋白表达情况。
　　3.应用QRT-PCR和Western blot分别检测人类结直肠癌SW480细胞的K-ras和Smad3的mRNA和蛋白水平变化情况，分析人结直肠癌细胞SW480经 X线照射引起发生上皮间质转化的可能信号传导通路。
　　结果：
　　1.经过X线照射后，应用Western blot检测Vimentin蛋白水平，发现与对照0Gy剂量组相比，所有实验组的表达均升高。
　　2.QRT-PCR检测K-ras的mRNA水平，发现与对照0Gy剂量组相比，2Gy剂量组无明显变化（P>0.05），而4、6、8Gy剂量组均明显降低（P<0.05）。但4、6、8Gy剂量组之间无明显统计学意义（P>0.05）。
　　3.QRT-PCR检测Smad3的mRNA水平，发现与对照组0Gy相比，X线照射组2、4、6、8Gy剂量组的Smad3的mRNA表达水平均明显升高（P<0.05）。但是各照射组之间的差异无统计学意义（P>0.05）。
　　4.应用Western blot检测K-ras蛋白水平，和对照0Gy剂量组相比，各实验组2、4、6、8Gy各剂量组K-ras蛋白的表达均明显下降（P<0.05）。
　　5.应用Western blot检测Smad3蛋白水平，和对照0Gy剂量组相比，除2Gy剂量组无明显变化外（P>0.05），其余4、6、8Gy剂量组Smad3蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）。
　　结论：
　　1.X线照射能够诱导结直肠癌细胞发生上皮间质转化。
　　2.X线照射有可能通过Smads信号途径介导结直肠癌SW480细胞发生上皮间质转化过程。
　　3.X线照射介导的结直肠癌SW480细胞发生上皮间质转化可能与K-ras途径无密切关系。

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引言

材料和方法

一 、材料

1 实验对象

2 药品与试剂

3 仪器和器材

4 主要试剂配制

二、 方法

1 细胞培养

2 照射方法及分组

3 免疫印迹Western-blot法检测X线照射前后Vimentin、Smad3和K-ras蛋白的表达

4 Smad3和K-ras mRNA的检测

5 数据结果处理

结果

1 X线照射后人结直肠癌SW480细胞的间质化指标Vimentin蛋白变化情况

2 不同X线剂量照射后，人结直肠癌SW480细胞的上皮间质化相关信号通路指标K-ras基因的mRNA和蛋白表达水平变化情况

2.1 K-ras基因的蛋白表达情况

2.2 K-ras基因的mRNA表达情况

3 不同X线剂量照射后，人结直肠癌SW480细胞的上皮间质化相关信号通路指标Smad3基因的mRNA和蛋白表达水平变化情况

3.1 Smad3基因的蛋白表达情况

3.2 Smad3基因的mRNA表达情况

讨论

结论

参考文献

综述

参考文献

致谢