微囊藻毒素LR对人肝母细胞瘤细胞株HepG2.2.15的影响

摘要

目的： 以稳定转染4倍体HBV基因组，并能稳定表达HBV相关蛋白的人肝母细胞瘤细胞株 HepG2.2.15细胞为模型，研究在 HBV感染条件下微囊藻毒素 LR（Microcystin-LR，MC-LR）对HepG2.2.15细胞的生物学行为和功能的影响。 方法： 1、MC-LR对HepG2.2.15细胞生物学行为的影响： （1）CCK-8法检测MC-LR对HepG2.2.15细胞增殖的影响。 （2）BD Pharmingen?AnnexinV FITC apoptosis detection kit检测MC-LR对HepG2.2.15细胞早期凋亡的影响。 （3）ELISA法研究MC-LR对HepG2.2.15细胞分泌的HBsAg及HBeAg表达的影响。 （4）侵袭小室法研究MC-LR对HepG2.2.15细胞侵袭迁移能力的影响。 2、MC-LR对HepG2.2.15细胞氧化应激水平的影响 （1）Image-iT LIVE greenreactive oxygen species detection kit检测MC-LR对HepG2.2.15细胞内活性氧自由基（Reactive oxygen species，ROS）水平的影响。 （2）Human8-Hydroxydeoxyguanosine（8-OHdG）ELISA Kit检测MC-LR对HepG2.2.15细胞内8-OhdG含量的影响。 3、MC-LR对HepG2.2.15细胞线粒体功能的影响 （1）Bioluminescent somaticcell ATP assay kit检测MC-LR对HepG2.2.15细胞内ATP水平的影响。 （2）Mitochondrial-specific dual-fluorescence probeJC-1 kit检测MC-LR对HepG2.2.15细胞线粒体跨膜电位的影响。 结果： 1、MC-LR对HepG2.2.15细胞生物学行为的影响 （1）0.001μg/ml-10μg/ml的MC-LR对HepG2.2.15细胞增殖变化无明显影响，100μg/ml的MC-LR降低HepG2.2.15细胞活性（P﹤0.05）。 （2）0.1μg/ml-10μg/ml的MC-LR处理HepG2.2.15细胞48h时，HepG2.2.15细胞未发生明显早期凋亡。 （3）1μg/ml-100μg/ml的MC-LR处理HepG2.2.15细胞24h、48h、72h时，未发现对细胞中HBsAg的表达有明显影响，但是处理48h时，100μg/ml的MC-LR可以促进细胞中HBeAg的表达（P﹤0.05）；72h时，10μg/ml、100μg/ml的MC-LR均可以促进细胞中HBeAg的表达（P﹤0.05）。 （4）0.1μg/ml-10μg/ml的MC-LR处理HepG2.2.15细胞48h后，HepG2.2.15细胞的侵袭、迁移能力增强（P﹤0.05）。 2、MC-LR对HepG2.2.15细胞氧化应激水平的影响 （1）0.1μg/ml-10μg/ml的MC-LR处理HepG2.2.15细胞48h时，HepG2.2.15细胞内的ROS水平升高（P﹤0.05）； （2）0.1μg/ml-10μg/ml的MC-LR处理HepG2.2.15细胞48h时，导致HepG2.2.15细胞内的8-OHdG水平的升高（P﹤0.05）。 3、MC-LR对HepG2.2.15细胞线粒体功能的影响 （1）0.1μg/ml-10μg/ml的MC-LR处理HepG2.2.15细胞48h时，导致HepG2.2.15细胞内ATP的水平下降（P﹤0.05）； （2）0.1μg/ml-10μg/ml的MC-LR处理HepG2.2.15细胞48h时，未发现HepG2.2.15细胞的线粒体膜电位有明显改变。 结论： 1、在本实验条件下，MC-LR可以改变 HepG2.2.15细胞的生物学表型，促进细胞内HBV复制，增强HepG2.2.15细胞侵袭迁移能力；但不影响HepG2.2.15细胞的增殖和凋亡。 2、在本实验条件下，MC-LR可导致 HepG2.2.15细胞 DNA氧化损伤，改变HepG2.2.15细胞内氧化应激水平，使细胞内ROS水平升高，DNA8-OHdG水平升高，细胞内ATP水平降低，但不改变细胞线粒体膜电位。

目录

声明

英文缩略词表及符号说明

前言

材料与方法

1. 实验材料

2. 实验方法

3. 数据处理及统计学分析

结果

1. HepG2.2.15细胞株HBsAg及HBeAg的表达

2. 细胞生物学行为实验

2 MC-LR对HepG2.2.15细胞氧化应激影响

3 MC-LR对HepG2.2.15细胞线粒体功能的影响

讨论

1、MC-LR对HepG2.2.15细胞增殖活性的影响

2、MC-LR对HepG2.2.15细胞中HBV复制的影响

3、MC-LR对HepG2.2.15细胞侵袭迁移能力的影响

4、MC-LR对HepG2.2.15细胞氧化应激的影响

5、MC-LR对HepG2.2.15细胞线粒体功能的影响

结论

参考文献

致谢

综述:微囊藻毒素的毒理学研究进展