探讨GGTI-2133对前列腺癌细胞的增殖、迁移、凋亡、化疗敏感性的影响及其作用机制

摘要

目的：
　　通过实验来观察GGTaseI酶抑制剂GGTI-2133对体外培养的人前列腺癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响，并检测其在肿瘤细胞对化疗药物敏感性上的影响，以及探讨可能的机制；
　　方法：
　　第一部分：（1）体外培养人前列腺癌DU145细胞，建立细胞实验模型（；2）分别用不同浓度的 GGTI-2133干预培养 DU145细胞相同的时间或者相同浓度GGTI-2133干预培养不同的时间，采用倒置光学显微镜观察及应用MTT法检测GGTI-2133对DU145细胞增殖的影响，并FACS法检测不同浓度GGTI-2133干预培养DU145细胞24h后的细胞周期的情况，并计算细胞增殖指数PI值；（3）不同浓度GGTI-2133干预培养DU145细胞24h后，应用TUNEL法检测DU145细胞凋亡情况；（4）采用transwell chamber检测对照组及实验组DU145细胞的迁移情况；（5）应用MTT法检测单用及联用GGTI-2133（5μmol/L）时阿霉素对DU145细胞半抑制浓度IC50值。
　　第二部分：不同浓度的 GGTI-2133干预培养DU145细胞24h后：（1）应用western blot检测RALA-GTP、RALB-GTP、RALBP1、REPS2/POB1、TBK1、NF-κB蛋白的表达；（2）应用RT-PCR检测Bcl-2、Bax基因的表达。
　　结果：
　　第一部分：（1）DU145细胞增殖受抑制，倒置光学显微镜观察及MTT检测结果显示，随着GGTI-2133浓度（在5～20μmol/L范围内）的升高、作用时间的延长，细胞增殖受抑制情况愈明显，且GGTI-2133能诱导DU145细胞周期G0/G1期阻滞，实验组细胞增殖指数与对照组比较差异明显（P<0.05）；（2）GGTI-2133能促进DU145细胞凋亡，实验组细胞凋亡率增高与对照比较差异具有统计学意义（P<0.05）；（3）实验组细胞迁移受抑制，其迁移到transwell板下室面的细胞数（37±16.29）明显少于对照组（327±22.13），差异显著（P<0.01）；（4）阿霉素单用时C50值为10.1190±0.1220，联合GGTI-2133（5μmol/L）时IC50值为5.7600±0.0580，两者比较差异显著（P<0.05）
　　第二部分：（1）随着 GGTI-2133浓度（在5～20μmol/L范围内）的升高， RALA-GTP、RALB-GTP、RALBP1、TBK1、NF-κB蛋白的表达量减少，而REPS2/POB1蛋白的表达量则增加，均与对照组比较差异显著（P<0.05）；（2）GGTI-2133可影响凋亡基因Bcl-2、Bax的表达，可使Bcl-2基因表达下调、Bax基因表达上调，且呈浓度依赖性。
　　结论：
　　1、一定的浓度和时间范围内，GGTI-2133能够抑制体外培养的人前列腺癌细胞增殖、迁移，促进细胞凋亡，并可提高阿霉素对人前列腺癌细胞化疗敏感性；
　　2、GGTI-2133对人前列腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及化疗药物敏感性的影响的可能机制是：GGTI-2133阻断了 RalGEF-Ral信号通路的激活过程，主要是抑制Ral-GDP转化为Ral-GTP，从而影响了下游相关蛋白（如RalBP1、REPS2、TB K1、NF-κB）的表达及下游信号通路（如NF-κB信号通路）的激活；另外在前列腺癌细胞的凋亡上，GGTI-2133也可通过下调Bcl-2基因表达及上调Bax基因表达来促进细胞的凋亡。

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前言

第一部分 GGTI-2133对人前列腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及化疗敏感性的影响

材料与方法

1、材料

2、实 验 方 法

3、统计学分析

结果

1、G G T I-213 3对人前列腺癌DU145细胞增殖的影响

2、T UNEL法检测GGTI-2133对体外培养的DU145细胞凋亡影响

3、G G T I-213 3对DU145细胞迁移的影响

4、GGTI-2133对阿霉素化疗敏感性的影响

讨论

第二部分 GGTI-2133影响人前列腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及化疗敏感性的机制探讨

材料与方法

1、材料

2、实 验 方 法

3、统计学分析

结果

1、人前列腺癌D U145细胞经GGTI-213 3处理后RALA-GTP、R ALB-GTP、RALBP1、R E P S2/PO B1、TBK1、NF-κB蛋白表达变化

2、R T-PC R检测Bcl-2、Bax基因表达

讨论

结论

参考文献

致谢

GGTaseI酶抑制剂的抗肿瘤研究进展

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