不同途径移植脂肪来源干细胞治疗大鼠肝硬化模型的实验研究

摘要

目的：比较不同途径移植脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)治疗肝硬化大鼠模型的疗效。
　　方法：从健康SD雄性大鼠腹腔脂肪组织提取ADSCs，纯化、培养并稳定传至第3代，经流式细胞术鉴定后，作为细胞移植治疗肝硬化SD雄性大鼠的种子细胞。50只SD雄性大鼠，设正常对照组（G1，n=10），其余40只采用四氯化碳与橄榄油混合液腹腔注射法建立肝硬化SD雄性大鼠模型，并随机分为：肝硬化模型对照组（G2，n=10）、门静脉移植组（G3，n=10）、肝动脉移植组（G4，n=10）、脾动脉移植组（G5，n=10），其中G1又分为G1a(细胞移植前处死正常对照组，n=5)、G1b(细胞移植后处死正常对照组，n=5)，G2又分为G2a(细胞移植前处死模型对照组，n=5)、G2b(细胞移植后处死模型对照组，n=5)；造模8周后处死G1a及G2a大鼠，取出肝脏组织做病理检查，观察是否造模成功；造模成功后G3、G4及G5分别经门静脉、肝动脉及脾动脉途径，注入ADSCs悬液1ml（细胞数约1x106）。分别于细胞移植前、移植后第4周、移植后第8周跟踪检测G1b、G2b、G3、G4及G5大鼠肝功能（包括ALB、TBIL、ALT、AST）；细胞移植后第8周处死全部大鼠，取出肝脏组织做病理检查并进行肝纤维化组织学半定量计分。
　　结果：从脂肪组织中分离培养的第3代细胞高表达ADSCs表面标记分子CD29(90.88％)，CD44（96.24%），CD90（95.52%），极低表达造血细胞表面分子CD34(0.08%)，CD45(0.34%)；G1a与G2a进行肝纤维化程度比较P<0.05，有统计学意义；细胞移植4周后，与G2b比较，G3、G4、G53组大鼠肝功能均得到明显改善，血清白蛋白显著升高(P<0.05)，转氨酶、胆红素显著降低(P<0.05)，肝纤维化程度显著减轻(P<0.05)；G3及G4大鼠肝功能改善及肝纤维化减轻程度优于G5(P<0.05)，前两者之间无显著性差异(P>0.05)。
　　结论：1.贴壁筛选法能便捷地从脂肪组织中分离培养出高纯度的ADSCs；2.CCl4与橄榄油混合液腹腔注射法可成功诱导出肝硬化模型；3.经门静脉、肝动脉及脾动脉三种途径移植ADSCs治疗肝硬化大鼠均可减轻肝纤维化程度，改善肝功能，门静脉及肝动脉移植途径略优于脾动脉移植途径，并且前两者之间无明显差异。

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英文缩略词表（Abbreviations and acronyms）

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前言

第一部分 分离纯化获取高纯度的脂肪来源干细胞

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第二部分 肝硬化动物模型的建立

1 实验材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

第三部分 脂肪来源干细胞移植对肝硬化大鼠肝脏的影响

1 实验材料

2 实验方法

3 结果

4讨论

结论

参考文献

致谢

综述