负载胚胎干细胞抗原的DC疫苗对肝癌小鼠皮下移植瘤的抗肿瘤免疫治疗作用研究

摘要

研究背景和目的：
　　以树突状细胞（dendritic cell，DC）为基础的抗肿瘤免疫疗法已成为研究热点。肿瘤组织表达多种胚胎期抗原，与胚胎干细胞之间存在共同的抗原或细胞表面分子。本研究通过制备胚胎干细胞抗原且用其致敏树突状细胞制备DC疫苗，旨在观察负载胚胎干细胞抗原的DC疫苗在小鼠肝癌皮下移植瘤模型中的抗肿瘤免疫治疗作用。
　　研究方法：
　　1.通过联合rmGM-CSF、rmIL-4，培养C57BL/6J小鼠骨髓来源的DC，胚胎干细胞抗原或肝癌细胞抗原诱导其成熟，制成DC疫苗；流式细胞术分析胚胎干细胞抗原致敏的DC疫苗、肝癌细胞抗原致敏的DC疫苗表面分子CD11c、CD80、CD86表达情况；
　　2.小鼠肝癌细胞株（Hepa1-6）4×10^6/只接种于小鼠腹部皮下，建立小鼠肝癌皮下移植瘤模型。根据不同抗原致敏的DC疫苗，设ESC-DC疫苗组、Hepa1-6-DC疫苗组、DC疫苗组和对照组（PBS组），每组10只小鼠，每周1次接种疫苗（2×10^6/只）或PBS（0.1ml/只），共3个治疗周期。每5天观察并记录各组小鼠皮下肿瘤的横径、长径，在任意肿瘤直径≥15mm，或开始出现肿瘤溃疡时处死所有小鼠，称量并比较各组肿瘤的质量。在治疗结束后5天ELISA法检测小鼠外周血清IgG含量；LDH法检测小鼠脾脏淋巴细胞对Hepa1-6的细胞毒性杀伤能力；流式细胞术检测小鼠脾脏淋巴细胞中CD4+CD25+FoxP3+T细胞含量。
　　结果：
　　1.成功培养小鼠骨髓来源的DC，经流式表型检测，DC表面分子CD11c约占78％，ESC-DC表面分子CD80、CD86表达率(53.81%±4.48%、52.63%±5.83%)高于Hepa1-6-DC(46.57%±5.93%、42.88%±3.90%)、DC(35.04%±9.91%、34.67%±5.10%)，p<0.05；
　　2.动态监测各治疗组和对照组小鼠皮下肿瘤的生长情况，结果显示：肿瘤平均生长速度ESC-DC组　　3.于治疗结束后5天，对荷瘤小鼠进行免疫学指标检测，结果显示：ESC-DC组外周血IgG分泌水平高于Hepa1-6-DC组、DC组、PBS组，差异有统计学意义，分别为77.99±6.43ng/ml、49.47±4.36ng/ml、40.61±5.17ng/ml、17.21±2.55ng/ml；ESC-DC组荷瘤小鼠脾脏淋巴细胞对Hepa1-6的细胞毒杀能力高于Hepa1-6-DC组、DC组、PBS组，在不同的效靶比例中差异均有统计学意义；流式检测脾脏CD4+CD25+FoxP3+ T细胞占CD4+T细胞的比例，结果显示：ESC-DC组（5.94%±0.98%）明显低于Hepa1-6-DC组（8.39%±0.60%）、DC组（10.65%±1.06%）、PBS组（13.27%±0.96%)，p<0.05。
　　结论：
　　1.胚胎干细胞抗原在体外能有效刺激小鼠骨髓来源的DC成熟，效果优于肝癌细胞(Hepa1-6)抗原；
　　2.ESC-DC疫苗、Hepa1-6-DC疫苗能够诱导荷瘤小鼠产生抗肿瘤免疫反应，减缓肝癌小鼠皮下移植瘤的生长速度；
　　3.ESC-DC疫苗对肝癌小鼠的抗肿瘤免疫保护作用优于Hepa1-6-DC疫苗及未经抗原致敏的DC疫苗，为ESC-DC疫苗的临床应用提供理论和实验基础。

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前言

第一部分 小鼠骨髓来源树突状细胞分离、培养及DC疫苗的制备

材料与方法

结果

第二部分 负载不同抗原的DC疫苗在肝癌小鼠的免疫治疗作用

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述: 树突状细胞疫苗及其在原发性肝癌中的免疫治疗作用

致谢