AD-ING4-OSM对鼻咽癌CNE-2细胞体外抑制作用实验研究

摘要

目的：研究腺病毒载体介导的双基因共表达（Ad-ING4-OSM）对鼻咽癌CNE-2细胞体外抑制作用及机制。
　　方法：将基因重组腺病毒载体反复感染HEK293t细胞，经反复扩增取病毒上清冷冻备用；利用不同剂量携带有绿色荧光蛋白(GFP)的空腺病毒载体（Ad-GFP）感染鼻咽癌CNE-2细胞确定最佳感染复数(MOI)；RT-PCR检测外源性ING4和OSM基因的转录；PI单染流式细胞仪（FCM）检测各实验组鼻咽癌CNE-2细胞凋亡效应；MTT检测各实验组鼻咽癌CNE-2细胞生长抑制效应；Hoechst33285核染色观察各实验组鼻咽癌CNE-2细胞凋亡核形态学改变；RT-PCR检测分析鼻咽癌CNE-2细胞的细胞周期和凋亡相关基因P53、P27、P21、Survivin的表达。
　　结果：经反复感染HEK293t细胞后，获得病毒滴度约为1.3~2.7×109pfu/ml；腺病毒载体（Ad-GFP）感染鼻咽癌CNE-2细胞最佳感染复数为100MOI；RT-PCR检测确定腺病毒介导的ING4和OSM基因可在鼻咽癌CNE-2细胞中转录，且在对照组和空白组未检测出内源性ING4和OSM基因转录；PI单染流式细胞仪（FCM）检测鼻咽癌CNE-2细胞凋亡效应，双基因共表达（Ad-ING4-OSM）组明显明显高于单基因Ad-ING4组和Ad-OSM组（P＜0.05），单基因组之间无明显差异，但优于空白组和空病毒组(P＜0.05)，空白组和空病毒组间无统计学意义(P>0.05)；MTT检测发现双基因共表达（Ad-ING4-OSM）组鼻咽癌CNE-2细胞生长抑制效应明显优于单基因ING4组和OSM组（P＜0.05），单基因组之间无明显差异(p>0.05)，但优于空白组和空病毒组(P＜0.05)；Hoechst33285核染色观察到双基因共表达（Ad-ING4-OSM）组鼻咽癌CNE-2细胞中细胞核和细胞质内可见浓染致密的颗粒块状蓝色荧光及明显核形态变化；RT-PCR检测分析显示Ad-ING4-OSM双基因共表达可明显上调P53、P27、P21和下调Survivin等细胞周期和凋亡相关基因表达。
　　结论：⑴与单基因相比AD-ING4-OSM双基因共表达可在体外显著抑制鼻咽癌CNE-2细胞生长，促进凋亡，具有抑瘤增效作用，其作用机制可能是上调了P53、P27、P21和下调Survivin等细胞周期和凋亡相关基因的表达。⑵腺病毒可作为鼻咽癌基因治疗的安全有效的载体。

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前言

1.材料与方法

2．结果

3 讨论

结论

参考文献

致谢

附录A论文彩图

附录B 综述：鼻咽癌基因治疗研究的新进展

附录 C

附录 D缩略词语