小胶质细胞P2X4受体促进慢性内脏痛脊髓中枢的敏化

摘要

目的：
　　探究小胶质细胞P2X4受体对慢性功能性内脏痛脊髓中枢敏化作用,为慢性内脏痛的药物治疗提供新的作用靶点和治疗方向。
　　方法：
　　新生SD大鼠出生第3～21天，每天固定时间给予3小时母婴分离，建立肠易激综合征（IBS）慢内脏痛大鼠模型。通过检测大鼠腹外斜肌对结直肠扩张的放电反应来评估IBS模型建立是否成功，并记录大鼠腹外斜肌在鞘内给予P2X4受体阻断剂5-BDBD、激动剂C5-TDS前后对于结直肠扩张的放电幅值；采用Western blot方法检测大鼠脊髓P2X4受体以及脑神经营养因子（BDNF）的表达情况；借助免疫组化的方法检测大鼠脊髓背角离子钙接头蛋白1（Iba-1）表达情况来观察小胶质细胞的活化状态；通过免疫荧光双标方法观察大鼠脊髓背角P2X4受体与Iba-1蛋白表达部位是否一致来确认P2X4受体是否在小胶质细胞上表达。
　　结果：
　　与正常大鼠相比较，IBS大鼠腹外斜肌对结直肠扩张刺激反应显著增强（p<0.05）；鞘内给予P2X4受体阻断剂5-BDBD可抑制IBS和正常大鼠腹外斜肌对结直肠扩张的放电反应，同等剂量下，其对IBS大鼠的阻断反应更明显（p<0.05），而且在IBS大鼠该阻断剂表现出明显的剂量依赖效应；鞘内给予P2X4激动剂C5-TDS后，IBS和正常大鼠腹外斜肌对结直肠扩张刺激放电反应显著增强，同等剂量下，对IBS大鼠的激动作用更明显（p<0.05），而且在IBS大鼠该激动剂表现出明显的剂量依赖效应；Western blot结果显示，与正常大鼠相比较，IBS大鼠脊髓胸腰段和腰骶段P2X4受体显著表达（p<0.05）及 BDNF蛋白显著表达（p<0.05）；而且鞘内给予P2X4受体阻断剂后，BDNF在IBS大鼠脊髓表达的抑制程度显著高于正常大鼠（p<0.05）；免疫组化结果显示，与正常大鼠相比较，IBS大鼠脊髓背角 Iba-1蛋白显著表达（p<0.05），形态发生不同程度的肥大，而且鞘内给予P2X4受体阻断剂后，Iba-1在IBS大鼠脊髓背角的表达抑制程度显著高于正常大鼠，肥大状态被不同程度的减轻；荧光双标结果显示，IBS和正常大鼠P2X4受体和Iba-1蛋白在脊髓背角共表达。
　　结论：
　　脊髓小胶质细胞P2X4受体对慢性内脏痛中枢具有敏化作用，其机制可能是通过激活小胶质细胞释放脑神经营养因子导致了慢性内脏痛的中枢敏化。

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中英文缩略词表

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前言

材料与方法

1 材料

2 方法

结果

3.1 IBS大鼠内脏痛敏行为显著性增强

3.2 P2X4受体在IBS大鼠脊髓的表达显著增强

3.3免疫组化检测Iba-1在大鼠脊髓背角的表达和分布

3.4免疫荧光双标显示P2X4在小胶质细胞上表达

3.5 P2X4受体参与了慢性内脏痛发生

3.6 P2X4受体阻断剂5-BDBD显著抑制了Iba-1在大鼠脊髓背角的表达

3.7 BDNF在IBS大鼠脊髓显著表达

3.8 P2X4受体阻断剂5-BDBD显著抑制了BDNF在大鼠脊髓的表达

讨论

4.1 IBS模型的建立与评估

4.1 P2X4受体在慢性内脏痛觉敏化中的作用

4.2 小胶质细胞P2X4受体在IBS慢性内脏痛治疗中具有重要的研究前景

结论

参考文献

综述:P2X4受体在痛觉传导中的相关研究

致谢