钩吻素子对Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎大鼠脾脏T辅助细胞的调节作用

摘要

目的： 在Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎大鼠模型上，观察钩吻素子对类风湿关节炎的治疗作用，探讨钩吻素子对模型大鼠脾脏T辅助细胞的调节作用，为钩吻素子治疗类风湿关节炎提供科学依据。 方法： 选用雄性Wistar大鼠，以2次皮内注射鸡Ⅱ型胶原的方法建立胶原诱导类风湿关节炎（CIA）模型。筛选建模成功的大鼠40只，随机分为模型组、以及模型大鼠甲氨蝶呤处理组和钩吻素子高、低剂量处理组，每组10只，另有10只正常大鼠设为对照组。从初次免疫后第21天起，钩吻素子高、低剂量处理组分别灌胃给予钩吻素子盐酸盐15 mg/kg、0.6 mg/kg，每天1次，连续10天，模型组及对照组则灌胃给予等体积生理盐水，而甲氨蝶呤组灌胃给予甲氨蝶呤1mg/kg，每2天给灌胃1次，连续10天。以后足机械痛阈（MWT）评价关节疼痛、后足容积和关节炎指数（AI）评分评价关节炎症、血清 C-反应蛋白（CRP）水平评价全身炎症，并以HE染色及镜下评分评价关节的组织形态学改变，分别于建模前及建模后每2天行MWT测定，每5天行AI评分及后足容积测定，并于给药前和给药后第3、7、10天以酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清CRP水平，观察灌胃给予钩吻素子盐酸盐对模型大鼠的治疗作用。上述观测结束后处死大鼠，取各组大鼠后足踝关节，行HE染色并观察病理变化；分离脾脏制备脾细胞悬液，以流式细胞术检测T辅助（Th）细胞亚群Th1、Th2、Th17、Treg细胞占脾细胞的相对数量，ELISA法检测脾细胞上清液炎症细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17、TGF-β水平。 结果： 建模后模型大鼠后足MWT出现下降，建模后第14天显著低于对照组，提示出现机械痛敏；足部出现明显红肿，后足容积显著高于对照组，AI评分随时间呈进行性升高；建模后21天大鼠血清CRP水平也显著升高；HE染色结果显示，模型大鼠后足踝关节有大量炎性细胞浸润，可见关节结构损伤。灌胃给予钩吻素子能够显著缓解CIA大鼠的机械痛敏，抑制后足红肿及血清CRP水平的升高，改善关节镜下表现及评分。上述结果提示灌胃给予钩吻素子能显著改善CIA大鼠关节疼痛、炎症及结构破坏，对模型动物有显著治疗作用。流式细胞术检测结果显示，建模后30天，CIA大鼠脾脏Th1/Th2、Th17/Treg细胞数量比例显著高于对照组；ELISA检测结果与其一致，由Th1细胞分泌的IFN-γ与Th2细胞分泌的IL-4水平比值（IFN-γ/IL-4）、Th17细胞分泌的IL-17A与Treg细胞分泌的TGF-β水平比值（IL-17A/TGF-β）亦出现显著升高，提示CIA大鼠脾脏Th细胞出现Th1/Th2、Th17/Treg细胞生理性平衡的破坏，致炎性细胞Th1、Th17及其分泌的致炎细胞因子IFN-γ、IL-17A相对占优。钩吻素子及阳性对照药甲氨蝶呤均可回转 CIA大鼠脾脏Th1/Th2、Th17/Treg细胞比例及相应炎症细胞因子IFN-γ/IL-4、IL-17A/TGF-β比例，钩吻素子高剂量处理组、甲氨蝶呤组Th1/Th2、Th17/Treg细胞比例及IFN-γ/IL-4、IL-17A/TGF-β比例均显著低于模型组（P<0.05，P<0.05），提示钩吻素子对CIA大鼠脾脏Th细胞具有调节作用。 结论： 钩吻素子对CIA大鼠具有显著的治疗作用，可能与其对模型大鼠脾脏Th细胞的调节作用有关。

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英文缩略词表

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前言

材料和方法

1材料

1.1实验动物

1.2实验药品和试剂

1.3实验仪器

2方法

2.1建立Ⅱ型胶原诱导的Wsitar大鼠类风湿关节炎模型

2.2大鼠后足机械痛阈测定法

2.3大鼠足部炎症评价方法

2.4 组织形态学检查法

2.5 流式细胞术

2.6 酶联免疫吸附法

2.7实验方案

2.8统计学处理

结果

1 钩吻素子对CIA大鼠的治疗作用

1.1 钩吻素子对CIA大鼠后足机械痛敏的缓解作用

1.2 钩吻素子对CIA大鼠后足炎症的抑制作用

1.3 钩吻素子对CIA大鼠踝关节组织病理变化的影响

1.4钩吻素子对CIA大鼠血清CRP水平的影响

2 钩吻素子对CIA大鼠脾脏Th细胞相对数量的调节作用

2.1 CIA大鼠脾脏Th细胞亚群的失衡

2.2 钩吻素子对CIA大鼠脾脏Th1/Th2、Th17/Treg细胞的调节作用

3 钩吻素子对CIA大鼠脾脏Th细胞主要相关炎症细胞因子水平的调节作用

讨论

结论

参考文献

综述:T辅助细胞与类风湿关节炎发病关系的研究进展

致谢