小Ras同源蛋白ARHI在胰腺癌细胞上皮间质转化中的功能与机制

摘要

背景目的：胰腺癌是一种恶性水平很高，诊断和医治都很困难的消化道肿瘤，其发病率和死亡率呈逐年回升趋向。主要原因在于胰腺癌早期症状不明显，缺乏灵敏性高特异性强的早期诊断手段，恶性程度高，手术切除率低，特别是侵袭转移强是胰腺癌高死亡率的重要影响因素。EMT征象的主要特性是上皮细胞表型的丢失与间质特性的获得，并且EMT是肿瘤发生发展过程中的重要现象，不只有助于癌症细胞的早期传播，更是恶性肿瘤细胞取得迁移和侵袭能力的重要生物学过程，是细胞维持干性的重要因素。小Ras同源蛋白ARHI在胰腺癌中具有周期阻滞及抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡与自噬的作用，但其在胰腺癌上皮间质转化及转移侵袭中的功能与机制尚不明确。本实验旨在研究ARHI表达与胰腺癌细胞EMT及细胞干性标志蛋白表达相关性，并探讨ARHI介导EMT与细胞干性的功能与分子机制。 方法：首先通过免疫组化检测ARHI在不同进展的胰腺癌中，以及在转移与非转移性胰腺癌中的差异表达；其次，在不同分化程度的胰腺癌细胞中通过蛋白免疫印迹检测ARHI与EMT蛋白表达水平的相关性，并改变内源性ARHI表达后从蛋白和mRNA水平探讨了细胞EMT标志蛋白表达的变化；再次，通过Transwell检测细胞迁移能力、扫描电镜检测伪足与绒毛形成、以及共聚焦检测细胞干性微球体形成能力，明确ARHI在胰腺癌细胞EMT与侵袭相关生物学行为中的作用。同时对裸鼠进行脾脏注射构建肝转移模型，进一步验证ARHI对体内胰腺癌细胞迁移侵袭的影响。最后，应用ERK信号通路抑制剂U0126处理后，通过蛋白免疫印迹检测ERK磷酸化、EMT及细胞干性水平。 结果：ARHI表达与胰腺癌细胞恶性度正相关，与胰腺癌细胞EMT及细胞干性水平正相关。在体内外相关生物学功能研究，发现ARHI促进胰腺癌细胞EMT相关表型，如促进细胞微绒毛及伪足形成，促进微球体形成及侵袭迁移；信号通路筛选实验显示下调内源ARHI表达后ERK磷酸化明显上调；应用抑制剂后，大多数EMT标志蛋白表达被拮抗，然而Notch-1蛋白水平仍随ARHI表达下调而下调； 结论：我们研究证明ARHI对胰腺癌细胞EMT及细胞干性的促进效应并不完全依赖ERK通路，还与关键蛋白Notch-1的表达密切相关。

目录

封面

声明

目录

附录 主要英文缩略词表（ABBREVIATIONS）

中文摘要

英文摘要

第一章 前言

1.1上皮间质转化EMT与细胞干性

1.2 ARHI与肿瘤

1.3 ARHI与信号转导

第二章 材料与方法

2.1实验材料

2.2 实验方法

第三章结果与分析

3.1 ARHI表达量与EMT及细胞干性标志蛋白表达水平相关

3.2 ARHI促进胰腺癌细胞的侵袭与成球

3.3 ARHI促进肝转移动物模型的体内肿瘤细胞侵袭

3.4 ARHI下调ERK激活

3.5 ARHI 对EMT及细胞干性的促进效应与关键蛋白Notch-1的表达密切相关

第四章 讨论和结论

参考文献

综述：上皮间质转化（EMT）在肿瘤发生发展中的研究进展

致谢