miR-137靶向调控KDM1A/LSD1 抑制套细胞淋巴瘤增殖、诱导细胞凋亡

摘要

【目的】：探讨miR-137在套细胞淋巴瘤细胞株的表达水平，验证 miR-137对KDM1A/LSD1基因的调控，研究过表达miR-137对套细胞淋巴瘤细胞增殖、凋亡的影响及其可能的机制。 【方法】：1、RQ-PCR法检测miR-137在套细胞淋巴瘤细胞株与正常单个核细胞中的表达差异。2、双萤光素酶报告验证KDM1A/LSD1是miR-137的靶基因。3、miR-137 mimics经LipofectamineTM2000脂质体转染Jeko-1细胞后，应用四唑盐法（MTT）绘制细胞生长曲线、流式细胞仪分析细胞调亡率；Western blot检测miR-137 mimics作用后凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9表达水平的变化，及LSD1表达水平、组蛋白H3K4甲基化状态变化。 【结果】：1、RQ-PCR法检测，以2-ΔCt计算，miR-137表达水平在SP49细胞系、Mino细胞系、Jeko细胞系分别为：0.0360±0.0076、0.0173±0.0029、0.0151±0.0024；而在对照组（五个献血者单个核细胞）中为0.1425±0.0167，各个淋巴瘤细胞系与对照组差别均有统计学意义（p<0.05）。2、miR-137可以调控带有KDM1A/LSD13’UTR的luciferase的表达（p=0.0352）,显示了65-71位置的突变位点是miR-137的结合调控位点。3、MTT法显示，miR-137 mimics转染后对套细胞淋巴瘤细胞株 Jeko-1细胞增殖有明显抑制作用；流式细胞仪分析转染24h后，对照组、mimics NC组、miR-137 mimics组细胞凋亡率分别为（1.89±0.32）%、（3.12±1.75）%、（44.76±3.58）%，有统计学意义（p<0.05）。转染miR-137 mimic后，凋亡抑制蛋白Bcl-2下调，促凋亡Bax，凋亡执行蛋白 caspase-3、caspase-9表达水平明显上调。转染miR-137 mimic后，LSD1表达下降，H3K4me1、H3K4me2甲基化水平上调，H3K4me3状态未见明显变化。 【结论】： miR-137在套细胞淋巴瘤细胞株中呈现低表达。KDM1A/LSD1基因是miR-137下游的靶基因。miR-137可以靶向调控KDM1A/LSD1基因，过表达miR-137可以抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡，机制可能是抑制KDM1A/LSD1基因的表达，上调H3K4me1、H3K4me2甲基化水平，凋亡染色质的构象改变，启动细胞凋亡程序，抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。

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缩略词表

中文摘要

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前言

第一部分 miR-137在套细胞淋巴瘤细胞株与正常细胞中的表达差异

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

第二部分 双萤光素酶报告验证KDM1A/LSD1是miR-137的靶基因

一、材料与方法

二、结果

三、讨 论

第三部 过表达miR-137对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株增殖、凋亡的影响

一、材料和方法

二、结 果

三、讨 论

结论

参考文献

综述:组蛋白修饰与miRNA在套细胞淋巴瘤中的研究进展

致谢