miR-365靶向调控IRAK1促进脓毒症血管内皮细胞增殖和抑制细胞凋亡

摘要

目的 探讨微小RNA-365(miR-365)对脓毒症血管内皮细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),利用脂多糖(LPS)诱导HUVECs模拟炎性环境,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)检测miR-365、白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK1)的表达.实验分组:空白组、LPS组、LPS+miR-con组、LPS+miR-365组、LPS+miR-365+pcDNA组、LPS+miR-365+pcDNA-IRAK1组.甲基噻唑基四唑(MTT)检测6组细胞存活率;流式细胞术检测6组细胞凋亡率.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)含量.双荧光素酶报告实验验证miR-365与IRAK1的靶向调控关系;Western blot检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved Caspase-9)蛋白表达.结果与空白组比较,LPS组HUVECs中miR-365的表达水平显著降低(P<0.05),IRAK1 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05),HUVECs存活率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白表达量显著升高(P<0.05),TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著升高(P<0.05);与LPS+miR-con组比较,LPS+miR-365组HUVECs存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白表达量均显著降低(P<0.05),TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告实验证明miR-365可靶向调控IRAK1的表达;IRAK1过表达可部分逆转miR-365对LPS诱导的HUVECs增殖、凋亡及TNF-α、IL-1β、IL-6水平的影响.结论miR-365可通过靶向调控IRAK1的表达而影响血管内皮细胞增殖、凋亡及抑制炎性因子的分泌.