脂肪间充质干细胞在野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺血管内的定植

摘要

目的： 1.观察移植不同细胞数量的脂肪间充质干细胞（ADMSCs）在野百合碱（MCT）诱导的肺动脉高压（PAH）大鼠肺血管内的定植情况。 2.观察移植后不同时间ADMSCs后在MCT诱导的PAH大鼠肺血管内的定植情况。 方法： 1.从 SD大鼠分离培养ADMSCs；Ad5-EGFP作为标志物感染ADMSCs用于移植。MCT诱导建立PAH大鼠2周后移植细胞。移植后取肺组织连续冰冻切片，滂胺天空蓝和DAPI染色观察细胞定植情况、死亡情况、测平均肺动脉压(mPAP)。 2.分两个部分: (1)160只大鼠随机分为正常对照1（Ctrl1）组、PAH1组、正常肺动脉压移植组（Ctrl1-A）组和肺动脉高压移植组（PAH1-A）组。分别于移植后1、3、7、14和21天观察上述指标，各组各时间点观察8只。 (2)80只大鼠随机分为正常压力移植2(Ctrl2-A)组、肺动脉高压大鼠移植（PAH2-A）组。Ctrl2-A和PAH2-A组分别移植5个不同细胞数量（A0、A1、A2、A3、A4）的ADMSCs，分别为0、5×105/ml、1×106/ml、5×106/ml、1×107/ml，21天后观察及检测上述指标。 结果： 1.PAH1-A组中定植的 ADMSCs呈时间依赖性减少，（1、3、7、14、21天分别为：12.62±1.68、7.75±1.67、6.37±1.18、4.50±1.19、2.50±1.20）。Ctrl1和Ctrl1-A组未观察到定植的ADMSCs。移植21天后，PAH1-A组的mPAP较PAH1组显著下降（23.45±2.59vs：38.20±1.48，p<0.05）。 2.PAH2-A组中定植的细胞数呈细胞数量依赖性增加，（3.13±1.25、7.00±2.00、13.25±1.91、22.00±8.05）；移植细胞数为1×106～5×106/ml时的mPAP在PAH2-A2、PAH2-A3组较PAH2组显著降低(28.57±2.99、26.00±1.73 vs39.75±1.83)(p<0.05)；死亡百分比在107/ml组明显增加(37.5%)。 结论： 1.移植数量为5×105～1×107/ml的ADMSCs于MCT诱导的PAH时，ADMSCs均可以稳定定植于肺血管内。 2.移植1×106～1×107/ml的ADMSCs3周，均能降低MCT诱导的PAH大鼠的mPAP，于1×106/ml～5×106/ml时效果最佳。 3.移植ADMSCs于MCT诱导的PAH大鼠，最佳移植数为1×106～5×106/ml。

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引言

实验材料与方法

1实验材料

1.1 实验动物

1.2 实验材料与仪器

2 实验方法

2.1 ADMSCs的分离培养、感染与计数

2.2 MCT诱导PAH大鼠

2.3 ADMSCs的移植

2.4 动物实验分组及干预措施

2.5 连续冰冻切片

2.6 滂胺天空蓝和DAPI染色观察定植的ADMSCs

2.7右心导管法测定平均肺动脉压（mean pulmonary arterial pressure，mPAP）

2.8 统计学方法

结果

1 大鼠ADMSCs的分离、培养

2 Ad5-EGFP转染

3 连续切片后观察定植的ADMSCs

4 动物的一般状态及存活情况

5 ADMSCs在肺血管内的定植及其对mPAP的影响

5.1 细胞移植后不同时间细胞的生存情况及对mPAP的影响

5.2 不同数量的ADMSCs植入及对mPAP的影响

讨论

1 肺动脉高压及治疗

2 荧光及染色确定ADMSCs

3 ADMSCs在肺血管内定植

4 ADMSCs在其他组织器官内的定植

结论

参考文献

综述:脂肪间充质干细胞治疗在常见疾病中的研究进展

致谢