脂肪间充质干细胞对野百合碱诱发的肺动脉高压大鼠肺小动脉功能的影响

摘要

近来，本研究小组前期研究发现野百合碱(MCT)所致大鼠肺小动脉的重构先于肺动脉压力的增高，脂肪间充质干细胞(ADMSCs)移植可以改善肺小动脉的重构并降低肺动脉压力。但是，ADMSCs移植对MCT诱发大鼠肺动脉高压(PAH)的肺小动脉功能的影响目前尚未明确。
　　目的：观察ADMSCs早期和延迟干预对MCT诱发大鼠PAH进程中肺小动脉(SPA)的内皮依赖性舒张(EDdR)、非内皮依赖性舒张功能(EDiR)以及收缩功能(VCF)的影响。
　　方法：采用SD大鼠腹股沟皮下脂肪，经胶原酶消化法分离培养ADMSCs，移植前用带绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒转染标记。7周龄雄性SD大鼠112只，随机分为对照组(Ctr)、肺动脉高压组(PAH)、脂肪间充质干细胞早期干预组(ADMSCs-EI)和延迟干预组(ADMSCs-DI)。一次性腹腔注射MCT40mg/Kg建立肺动脉高压，Ctr组经腹腔注射相同体积的生理盐水。ADMSCs-EI组于MCT注射后1周，ADMSCs-DI组于MCT注射后2周，经左颈外静脉一次性给予1ml ADMSCs(1×106)，Ctr组和PAH组经左颈外静脉一次性给予相同体积的生理盐水。分别于ADMSCs移植后1W、2W、3W，右心导管法测定大鼠的肺动脉平均压(MPAP)，并采用离体血管张力法检测大鼠肺小动脉环对乙酰胆碱(Ach)、硝普钠(SNP)、去甲肾上腺素(NE)的反应。收缩或舒张敏感性用pD2值表示，pD2表示EC50(激动剂产生其50％最大效应的浓度)以10为底的负对数值。
　　结果：(1)ADMSCs早期干预后1周，MPAP在Ctr、PAH、ADMSCs-EI组间无统计学差异[P均>0.05]。ADMSCs早期干预后2、3周与延迟干预后1、2、3周，与Ctr组相比，PAH组大鼠MPAP显著升高[P均<0.05]；而与PAH组相比，ADMSCs-EI与ADMSCs-DI组MPAP显著下降[P均<0.05]。ADMSCs-EI组1、2、3w分别与ADMSCs-DI组1、2、3w比较，ADMSCs-EI组大鼠MPAP降低更明显[P均<0.05]。
　　(2)ADMSCs早期干预后1、2、3周与延迟干预后1、2、3周，与Ctr组相比，PAH组大鼠肺小动脉环对不同浓度Ach诱导的EDdR明显减弱，其浓度-效应曲线明显右移，pD2值显著降低[P均<0.05]；而与PAH组相比，ADMSCs-EI与ADMSCs-DI组大鼠肺小动脉环的EDdR明显改善[P均<0.05]。ADMSCs-EI组1、2、3w分别与ADMSCs-DI组1、2、3w比较，大鼠肺小动脉环EDdR在两组间均无统计学差异[P均>0.05]。
　　(3)ADMSCs早期干预后1周，SNP诱导的EDiR在Ct r、PAH、ADMSCs-EI组间无统计学差异[P均>0.05]。ADMSCs早期干预后2、3周与延迟干预后1、2、3周，与Ctr组相比，PAH组大鼠肺小动脉环的EDiR明显减弱，其浓度-效应曲线明显右移，pD2值显著降低[P均<0.05]；而与PAH组相比，ADMSCs-EI与ADMSCs-DI组大鼠肺小动脉环的EDiR明显改善[P均<0.05]。ADMSCs-EI组1、2、3w分别与ADMSCs-DI组1、2、3w比较，大鼠肺小动脉环EDiR在两组间均无统计学差异[P均>0.05]。
　　(4)ADMSCs早期干预后1、2、3周与延迟干预后1、2、3周，NE诱导的VCF在Ctr、PAH、ADMSCs-EI、ADMSCs-DI组间无统计学差异[P均>0.05]。
　　结论：(1)MCT所致大鼠肺小动脉的内皮依赖性舒张功能受损先于肺动脉压力的增高，MCT所致大鼠肺动脉压力升高与肺小动脉舒张功能受损关系密切；
　　(2)无论ADMSCs早期干预还是延迟干预，ADMSCs移植后1、2、3周均可以改善受损的肺小动脉内皮依赖性及非内皮依赖性舒张功能，有效地降低MCT诱导的肺动脉高压；
　　(3)ADMSCs早期干预组降低MCT诱导大鼠肺动脉高压的疗效优于延迟干预组，但是在改善受损的肺小动脉内皮及非内皮依赖性舒张功能方面，ADMSCs早期干预组与延迟干预组无明显差异。

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引言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

结果

1动物的一般情况及存活率

2大鼠A DMS Cs的分离、培养及移植

3 A DMSCs移植对MCT模型大鼠MPAP的影响

4 A DM SCs移植对MCT模型大鼠肺小动脉( SP A)内皮依赖性舒张(E DdR )、非内皮依赖性舒张功能( ED iR )以及收缩功能( VC F)的影响

讨论

1 本实验的主要发现结果

2本实验研究的模型基础

3 G F P标记的ADM SC s在P AH大鼠肺内的定植分化

4 AD MS Cs治疗对PAH大鼠肺循环血流动力学及肺小动脉功能的影响及可能的机制

5 问题及展望

结论

参考文献

致谢

细胞疗法在实验性肺动脉高压中的研究进展

参考文献