孕期锌缺乏对大鼠胚胎心脏发育的关键性转录因子的影响

摘要

1.1目的：
　　研究大鼠孕期锌缺乏导致的胎心畸形和胎心发育过程关键调节因子改变。
　　1.2方法：
　　清洁级健康SD大鼠27只随机分为3组，每组9只：分为配饲组（饲料含锌量正常30ug/g）、缺锌组（饲料含锌量5ug/g）、对照组（饲料含锌量30ug/g）。孕期分别用不同锌含量的人工合成饲料供给，配饲组食用正常饲料,但进食量限制为缺锌组大鼠前1 d的进食量。至大鼠孕第19天时剖腹取鼠胚心，同时留取孕鼠静脉血，原子吸收法测定孕鼠血锌值。大体、光镜下观察胎鼠心血管发育的形态学特点及病理组织学检查。选取30只胎鼠 Western blotting法检测心脏组织 GATA结合蛋白4（GATA4）、胰岛素基因增强结合蛋白（Islet-1）和 Nk2型同源盒转录因子5（Nkx2.5）蛋白表达量变化及Real-time PCR法检测mRNA的含量；用剩余胎鼠采血，Elisa法检测仔鼠血清中SOD、IL-1β的含量。
　　1.3结果：
　　1.3.1光镜下，缺锌组心脏出现心肌细胞、细胞核、染色质结构等异常改变；配饲组及对照组未见明显的胎鼠心肌细胞异常。
　　1.3.2缺锌组胎鼠心脏组织Islet-1、GATA4蛋白和GATA4、Nkx2-5、Islet-1的mRNA表达量降低，但对Nkx2-5蛋白表达量无影响。比较缺锌组与对照组的三种关键性转录因子mRNA及Islet-1、GATA4蛋白的表达量，差异有统计学意义?P?0.05)。配饲组与对照组的三种关键性转录因子mRNA及Islet-1、GATA4蛋白及其mRNA的表达量，差异无统计学意义?P>0.05)。
　　1.3.3缺锌组出生胎鼠血清IL-1β水平?P?0.05)，降低SOD水平?P?0.05)，差异有统计学意义，对照组及配饲组之间，SOD及IL-1β含量差异无统计学意义。
　　1.4结论：
　　1.4.1光镜下缺锌组胎鼠心肌细胞核形态不规则，大小各异，核皱缩溶解，染色质不均匀，部分胞浆局灶性稀疏，胞浆灶性减少；心脏部分组织血管明显充血，血管内红细胞密集。配饲组及对照组心脏组织形态未见明显改变，提示缺锌可以导致心脏组织细胞结构异常。
　　1.4.2缺锌降低胎鼠心脏组织Islet-1、GATA4蛋白和GATA4、Nkx2-5、Islet-1的mRNA表达量。这提示缺锌对仔鼠心脏发育有一定的影响，其机制可能与抑制GATA4和Nkx2-5、Islet-1转录因子mRNA的表达从而导致相关蛋白表达量改变，最终导致胎鼠心脏组织结构的改变。
　　1.4.3缺锌胎鼠血浆IL-1β水平升高，SOD水平降低（P?0.05）。提示锌缺乏引起的氧化应激炎症反应是胎鼠先天性心脏畸形发生的另一机制。

目录

声明

附录

3 前言

4 材料与方法

4.1 材料

4.2 实验方法

5 结果

5.1 各组母鼠血锌水平

5.2 新生鼠心脏心肌细胞的病理学改变

5.3胎鼠GATA4、Nkx2-5及Islet-1三种转录因子蛋白的表达

5.5 新生鼠及幼鼠Nkx2-5转录因子mRNA及GATA4转录因子mRNA的表达

5.6 ELISA法检测胎鼠血浆IL-1β水平、比色法在酶标板上反应检测血清SOD水平。

6 讨论

7 结论

参考文献

综述:锌缺乏引起的胎儿先天性心脏病的表观遗传学

致谢