复方奥硝唑小檗碱口腔膜的制备及其抗SD大鼠牙周炎作用研究

摘要

目的：本课题在药物体外抗菌活性试验基础上制备复方奥硝唑小檗碱口腔膜，研究该膜剂的生物学性能、体内外释放度，并对其抗SD大鼠牙周炎动物模型作用效果进行初步评价。
　　方法：（1）采用微量液体稀释法研究奥硝唑和小檗碱对牙周炎常见致病菌的体外抗菌活性，确定其最低抑菌浓度。采用微量棋盘稀释法进行奥硝唑、小檗碱联合药敏试验。（2）应用L9（34）正交试验方法，以药膜外观、体外释放度作为考察指标，对复方奥硝唑小檗碱口腔膜的各主药和辅料的比例进行筛选优选处方，对依照最佳处方制得的膜剂进行质量控制研究；采用抑菌圈法观察复方奥硝唑小檗碱口腔膜对牙周炎常见致病菌的体外抑菌作用；采用附着板法观察口腔膜对Sm的解吸附作用；采用杯碟法研究药膜稀释液对Aa敏感性。（3）成功建立SD大鼠牙周炎动物模型的基础上予以药物治疗，观察给药前后大鼠受试牙周组织临床指标变化；取大鼠受试牙齿颊、腭侧黏膜及上颌骨，常规HE染色，观察其病理学变化；免疫组织化学法检测受试牙槽骨及其周围组织TNF-α表达情况。使用酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清中TNF-α、IL-1β的含量；UPLC测复方奥硝唑小檗碱口腔膜体内释放度。
　　结果：（1）奥硝唑对Pg、Fn、Aa、Av、Sm MIC分别为0.64、0.000078、0.64、0.64、5.12mg·mL-1；小檗碱的MIC分别为0.16、0.01、0.16、1.28、0.04mg·mL-1。奥硝唑与小檗碱联用，对Pg、Aa，为协同作用；对Fn，为相加作用；对Av，为无关作用。（2）最优处方：1mg奥硝唑、0.5mg小檗碱，1.5g羧甲基纤维素钠，3g聚乙烯醇，1g明胶，2.5g甘油，0.5mL聚山梨酯80，加水量120mL。所制得的复方奥硝唑小檗碱口腔膜基本符合制剂质量要求。该膜剂对牙周炎常见致病菌有明显的抑制，对Sm有抗附着作用。该口腔膜稀释液的抑菌作用比对照物奥硝唑、小檗碱单药膜连续稀释液强。将其连续稀释4h后，稀释液对Aa仍有明显的抑制作用。（3）牙周炎大鼠ORN组、BER组、ORN-BER组GI均较治疗前下降（P＜0.05），PD、MD均有下降趋势（P＞0.05）。各治疗组GI、PD、MD与模型组比较也均有降低趋势，其中ORN-BER组PD明显低于模型组（P＜0.05）。受试牙周组织及牙槽骨HE染色结果表明ORN-BER组较ORN、BER组角化层增生减少，各层分布较正常，基底膜较完整，牙周膜纤维组织有一定增生但排列规则，炎症细胞浸润减少，ORN-BER组大鼠受试牙周组织TNF-α表达明显低于ORN组、BER组（P＜0.01）。ORN-BER组大鼠血清中TNF-α含量比BER组低（P＜0.05）；ORN-BER组血清中IL-1β含量明显低于BER组（P＜0.01）、ORN组（P＜0.01）。体内释放度试验显示该膜剂在SD大鼠牙周袋内放置5h后其唾液中ORN浓度为765.9±23.5μg·ml-1，BER浓度为410.4±31.9μg·ml-1，均高于牙周常见致病菌的MIC。
　　结论：基于奥硝唑、小檗碱对牙周炎常见致病菌具有协同及互补抑菌效果，通过处方筛选制备复方奥硝唑小檗碱口腔膜。该膜剂为速效、缓释剂型，工艺重现性好，质量标准符合中国药典要求。
　　该膜剂在体外试验可较为稳定地抑制牙周炎常见病原菌。牙周炎大鼠试验可见该膜剂在大鼠口腔内可快速达到治疗浓度，至少5h内维持有效抑菌浓度。治疗后牙周炎大鼠血清及牙周组织中炎症因子水平降低，临床、病理指标改善，且均较ORN、BER单药组更为明显。
　　综上，考虑复方奥硝唑小檗碱口腔膜对于牙周炎治疗具有较好的发展前景。

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