SNSR受体激动剂在CFA炎性大鼠脊髓痛觉调制中的作用

摘要

疼痛是告诫机体遭受损伤的报警信号。通常的(急性)疼痛是一种正常的平衡和保护机制，使得机体减少或避免受到伤害；但它也可能持续存在，成为一种神经系统的疾病状态即慢性疼痛，过度的痛反应能使机体产生一系列生理病理反应，妨碍人们正常生活和工作、并带来极大痛苦，对慢性疼痛的研究和治疗已成为全世界各国科学家和临床医师共同协作的领域。目前，临床治疗中常用的镇痛药主要有通过抑制环氧酶途径阻断前列腺素合成的非甾体类解热镇痛药和直接激活阿片受体的麻醉性镇痛药。由于前列腺素和阿片受体在人体内分存广泛，此类镇痛方式必然会引起一系列较严重的不良反应，如非甾体抗炎药(NSAIDs)的胃肠道反应、胃溃疡、胃出血及变态反应等副作用，而阿片类药物所致多种不良反应，如：耐受、恶心呕吐、呼吸抑制、便秘等副作用。因此，研究应用于外周或中枢神经系统的高效的无副作用的镇痛药成为疼痛领域的重要课题。 SNSR受体的mRNA只独特地存在于脊髓背根神经节和三叉神经节的中小型神经元里，具有高度的组织特异性，该类神经元为伤害性信息传入的初级神经元，推测SNSR可能参与伤害性信息的调制。 BAM8-22是一种人工合成的BAM类神经肽(目前在体内还未发现其存在)，不含有BAM22 N-末端区域决定与阿片受体结合的YGGFM序列，不具有阿片肽活性，它只能特异性地与SNSR受体结合。(Tyr6)-γ2-MSH-6-12(以下简称MSH)是SNSR受体另一种人工合成的激动剂，在大鼠体内，这两种选择性激动剂与SNSR受体的亲和力表现为：(Tyr6)-γ2-MSH-6-12>BAM8-22。 最近，我们实验室Jiang等人发现，BAM22能部分翻转吗啡耐受，恢复吗啡的抗伤害效力，提示了SNSR受体在伤害性信息调制中可能存在重要作用。Chen等人从SNSR受体的选择性激动剂BAM8-22和(Tyr6)-γ2-MSH-6-12入手，发现了SNSR受体被激活能抑制在福尔马林引起的痛觉过敏具有镇痛作用，降低脊髓背角I-II，V-VI层c-fos的表达。由于SNSR特异的分布于外周管理痛觉的感觉神经元中，所以阐明SNSR受体生理功能对镇痛研究意义重大。 本实验，我们采用了行为学、免疫组织化学等实验手段，通过建立CFA炎性痛模型，应用SNSR受体的激动剂(BAM8-22，MSH)在整体水平和细胞水平对SNSR受体的功能进行了研究。 行为学实验结果表明：(1)在CFA炎性痛模型中，与Saline对照组相比，鞘内注射SNSR受体激动剂--BAM8-22和MSH能剂量依赖地恢复CFA炎性大鼠对热刺激缩足反射潜伏期基础值，降低热痛觉过敏，减轻CFA致炎引起足跖红肿。但鞘内注射BAM8-22不能恢复CFA炎性大鼠对机械刺激缩足反射潜伏期基础值，降低机械痛觉过敏，也不能延长机械刺激引起的缩足反射潜伏期。 (2)观察SNSR受体激动剂在CFA炎性大鼠热痛觉过敏中的最大抗伤害作用效果，结果显示在不同的时间鞘内注射BAM8-22和MSH，其镇痛效果呈现不同的变化。a.与Saline对照组相比，0 h鞘内给予SNSR受体激动剂(BAM8-22和MSH)不能抑制CFA致炎时大鼠对热刺激的疼痛反应。b.在CFA 24 h，鞘内注射BAM8-22和MSH有效降低CFA炎性大鼠对热刺激的疼痛反应。鞘内注射30 nmol BAM8-22后20 min产生6.22±1.44％的最大可能的抗伤害作用(MPE％)，维持40 mm左右，鞘内注射15 nmolMSH后15 min产生5.81±1.13％的最大可能的抗伤害作用(MPE％)，维持30 min左右。 为了进一步研究CFA炎性痛模型中鞘内注射SNSR受体激动剂减轻热痛觉过敏的原因，我们用免疫组化方法检测了脊髓背角和背根神经节中NOS，nNOS，CGRP的表达变化，结果发现：与Saline对照组相比，鞘内注射BAM8-22能明显下调大鼠炎症侧脊髓背角浅层NOS、nNOS阳性神经元的表达量，且能显著降低脊髓背角浅层和背根神经节中、小型神经元CGRP的阳性细胞表达。该结果进一步解释在CFA慢性炎症痛模型中，使用SNSR受体激动剂，引起热痛敏下降的原因。 以上结果表明：在脊髓水平，鞘内给予SNSR受体激动剂(BAM8-22和MSH)，能剂量依赖地恢复CFA炎性大鼠热刺激缩足反射潜伏期，降低热痛觉过敏，减轻大鼠足跖炎症红肿。通过免疫组织化学结果发现该抑制作用部分是通过下调脊髓背角浅层和背根神经节中传递伤害性信息的中、小型神经元中NOS、nNOS和CGRP阳性细表达来实现的。

目录

文摘

英文文摘

声明

绪论

第一章 鞘内注射SNSR受体激动剂抑制CFA引起的痛觉过敏

1 实验材料

1.1 实验动物

1.2 实验主要仪器

1.3 实验主要试剂

2 实验方法

2.1 鞘内插管手术

2.2 动物饲养与训练

2.3 建立CFA炎症痛模型

2.4 鞘内微量注射

2.5 光电刺激热痛行为测试

2.6 炎症水肿测试

2.7 机械刺激行为测试

3 实验分组

3.1 鞘内注射BAM8-22对大鼠缩足反射潜伏期的影响

3.2 鞘内注射MSH对大鼠缩足反射潜伏期的影响

4 数据统计分析

5 实验结果

5.1 鞘内注射BAM8-22对CFA炎性大鼠热／机械刺激反应的作用效果

5.2 鞘内注射MSH对CFA炎性大鼠热刺激反应的作用效果

6 讨论分析

第二章 SNSR受体激动剂对CFA炎性大鼠脊髓背角和背根神经节NOS／nNOS／CGRP表达的影响

1 实验材料

1.1 实验动物

1.2 实验主要仪器

1.3 实验主要试剂

2 实验方法

2.1 灌流固定及取材

2.2 脊髓NADPH-d组化法

2.3 脊髓免疫组织化学反应(ABC法，标CGRP，nNOS)

2.4 背根神经节(DRG)免疫组织化学反应(ABC法，标CGRP)

2.5 图像分析与统计

3 实验分组

4 统计学方法

5 实验结果

5.1 SNSR受体激动剂降低CFA炎性大鼠脊髓背角NOS表达

5.2 SNSR受体激动剂下调CFA炎性大鼠脊髓背角nNOS表达

5.3 SNSR受体激动剂抑制CFA炎性大鼠的脊髓背角CGRP表达

5.4 SNSR受体激动剂减少CFA炎性大鼠DRG中CGRP表达

6 讨论分析

6.1 鞘内注射BAM8-22能下调CFA致炎侧大鼠脊髓背角NOS／nNOS表达

6.2鞘内注射BAM8-22能显著降低CFA致炎侧大鼠脊髓背角和背根神经节CGRP的表达

第三章 结论

附录：英文缩略语一览

参考文献

攻读学位期间承担的科研任务与主要成果

致 谢

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