乙型肝炎病毒表面抗原对人肝星状细胞LX-2增殖与活化的影响

摘要

目的:肝纤维化是多种原因所致慢性肝病发展为肝硬化及肝癌的中间阶段，其发病原因及致病机制较为复杂。目前认为肝纤维化是各种因子如肝炎病毒、血吸虫病、酒精、药物及毒物等长期持续损害肝脏，组织发生修复时细胞外基质合成与降解失衡而引起的病理变化。肝星状细胞是纤维化肝脏中细胞外基质的主要合成细胞，肝星状细胞激活并转化为肌成纤维细胞样细胞是肝纤维化发生发展的核心环节。各种致肝纤维化因素均把肝星状细胞作为最终靶细胞，通过促使其转化为肌成纤维细胞这一共同途径导致肝纤维化的形成。乙型肝炎病毒在肝纤维化的进展中是一种高风险因素。尽管目前普遍的观点认为纤维化的产生是由于肝脏炎症所诱导的，但乙肝病毒是否直接促进肝纤维化，至今尚不明确。本研究的目的是通过使用乙肝病毒表面抗原直接刺激目前认为可以代替未成熟人类肝星状细胞的LX-2细胞系进行研究，探讨乙肝病毒表面抗原是否会促进人肝星状细胞LX-2的增殖和提高α-平滑肌肌动蛋白及Ⅰ型胶原蛋白在人肝星状细胞LX-2中的表达水平，进而引起肝纤维化。寻找乙肝病毒携带者等相对稳定的乙肝病毒感染者形成肝硬化的可能机制。
　　 方法:(1)在体外贴壁培养人肝星状细胞LX-2，用倒置显微镜观察细胞活性及形态;(2)将对数生长期LX-2细胞接种于96孔培养板，待细胞贴壁后加入不同终浓度的乙肝病毒表面抗原刺激24h，用噻唑蓝法测乙肝病毒表面抗原对LX-2细胞增殖的影响，并筛选出后续实验的刺激浓度;(3)将对数生长期的LX-2细胞均匀的接种于96孔培养板，待细胞贴壁后，将一定浓度的乙肝病毒表面抗原加入人肝星状细胞LX-2中对其刺激，以单独培养的人肝星状细胞LX-2为对照组，培养24h;(4)24h后分别收集细胞上清液，用酶联免疫吸附法检测乙肝病毒表面抗原对LX-2细胞的α-平滑肌肌动蛋白和胶原蛋白Ⅰ的蛋白表达水平的影响;(5)用SPSS18.0软件包，进行数据分析，对比实验组与对照组的α-平滑肌肌动蛋白和胶原蛋白Ⅰ的表达水平。
　　 结果:(1)LX-2细胞生长活性良好，倒置显微镜观察细胞呈星状，胞核呈椭圆形。(2)噻唑蓝法检测结果显示:不同浓度的乙肝病毒表面抗原均明显抑制LX-2细胞的增殖。(3)酶联免疫吸附测定法检测结果显示:与单独培养的LX-2细胞对照相比，加入乙肝病毒表面抗原刺激的LX-2细胞组α-平滑肌肌动蛋白在人肝星状细胞的表达水平无明显变化(P＞0.05)，Ⅰ型胶原蛋白在人肝星状细胞的表达水平无明显变化(P＞0.05)。
　　 结论:(1)一定浓度乙肝病毒表面抗原抑制人肝星状细胞的增殖。(2)乙肝病毒表面抗原对α-平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白在人肝星状细胞的表达水平无影响。(3)乙肝病毒表面抗原不能促进人肝星状细胞的活化。

目录

中英文缩略词汇表

摘要

引言

1 实验材料和方法

1．1 实验材料

1．2 实验方法

2 实验结果

2．1 LX-2细胞生长情况

2．2 HBsAg(5-25ng/ml)抑制人肝星状LX-2细胞的增殖

2．3 HBsAg对LX-2细胞α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白的表达均无影响

3 讨论

3．1 肝纤维化(hepatic fibrosis，HF)

3．2 肝星状细胞(HSC)与肝纤维化

3．3 关于选择LX-2细胞作为实验对象

3．4 Ⅰ型胶原与HSC的活化

3．5 α-SMA与HSC的活化

3．6 慢性乙型肝炎病毒与肝纤维化

3．7 MTT法则HBsAg对LX-2细胞增殖的影响

3．8 ELISA法测定HBsAg对LX-2细胞α-SMA和Ⅰ型胶原的影响

4 问题与展望

结论

参考文献

综述 肝纤维化发病机制的研究进展

致谢

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