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前言
1水稻草矮化病毒研究概况
1.1病害的发生、分布
1.2病毒的形态和理化特性
1.3血清学
1.4病毒与寄主间的互作
1.5病害防治
1.6分子生物学
1.6.1基因组RNA的末端保守序列
1.6.2基因组的结构、功能及表达策略
1.6.3基因组的复制和转录机制
1.6.4依赖RNA的RNA的聚合酶(RdRp)
1.6.5外壳蛋白(coat protein，CP)
1.6.6病害特异性蛋白(disease-specific protien，SP)
1.6.7其它可能编码的蛋白
1.7病毒的进化
1.8原生质体培养体系在植物病毒研究中的作用
1.9农杆菌介导的水稻转化技术
1.10存在问题与研究内容
2水稻草矮病毒沙县分离物(RGSV-SX)基因组RNA1-3的cDNA克隆与序列分析
2.1材料与方法
2.1.1材料
2.1.2方法
2.2结果与分析
2.2.1 RGSV-SX RNA1-3的分段RT-PCR及克隆策略
2.2.2 RGSV-SX基因组RNA1-3的核苷酸序列分析
2.2.3 RGSV-SX基因组RNA1-3所编码的氨基酸序列分析与同源性比较
2.2.4 RGSV RNA1-6三个分离物间核苷酸序列及所编码蛋白氨基酸序列同源性比较
2.3讨论
3 RGSV NS3蛋白的原核表达及抗血清的制备
3.1材料与方法
3.1.1材料
3.1.2方法
3.2结果与分析
3.2.1 NS3基因的克隆
3.2.2 NS3蛋白原核表达载体的构建及重组pGTNS3的筛选与鉴定
3.2.3融合蛋白的诱导表达
3.2.4 GST-NS3蛋白抗血清的制备与效价测定
3.2.5水稻和虫体内NS3基因产物的Western blot分析
3.3讨论
4 RGSV在水稻原生质体内的复制与表达
4.1材料与方法
4.1.1材料
4.1.2方法
4.2结果与分析
4.2.1细胞悬浮培养系的建立
4.2.2原生质体的分离和纯化
4.2.3接种后原生质体总蛋白的SDS-PAGE电泳
4.2.4 RGSV在水稻原生质体内的表达周期
4.2.5 RGSV编码蛋白在水稻原生质体内的表达周期
4.3讨论
5农杆菌介导的水稻草矮病毒对水稻的转化研究
5.1材料与方法
5.1.1材料
5.1.2方法
5.2农杆菌介导的病毒基因转化水稻
5.2.1不同水稻品种胚性愈伤组织的诱导
5.2.2根癌农杆菌的培养
5.2.3愈伤组织与根癌农杆菌的共培养
5.2.4抗性愈伤的筛选
5.2.5影响抗性愈伤组织转化频率的几种因素
5.2.6 GUS基因的活性检测
5.2.7抗性愈伤的分化培养
5.2.8转基因植株的再生及幼苗移栽
5.2.9转基因植株的检测
5.3结果与分析
5.3.1植物表达载体的构建
5.3.2重组农杆菌的酶切鉴定
5.3.3农杆菌介导的转化系统条件的优化
5.3.4 GUS基因活性检测
5.3.5抗性愈伤的筛选及转基因植株的再生
5.3.6 RT-PCR及Southern点杂交检测
5.4讨论
小结
参考文献
致谢
附录1缩写词和英汉对照
附录2试验所用试剂及缓冲液配方
附录3攻博期间发表(投稿)的论文
附录4 RGSV RNA1-6三个分离物间核苷酸序列同源性比较
