短葶山麦冬离体培养及多糖动态变化研究

摘要

麦冬是园林中常见的地被植物，也是重要的中草药。本研究以短葶山麦冬Liriope muscari(Desne.) Bailey为试验材料，进行短葶山麦冬快速繁殖、愈伤组织诱导与继代保持、细胞悬浮培养、愈伤组织多糖提取的方法及多糖的动态变化研究，同时也进行愈伤组织、组培苗和田间自然生长状态下麦冬多糖含量比较。其主要研究结果如下： 1短葶山麦冬快速繁殖技术研究 短葶山麦冬茎尖分化培养基MS+BA2.0 mg/L+ NAA0.2mg/L，茎尖分化率高，最高分化率达到90％。丛生芽增殖培养基选择MS+BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L为佳，一定高浓度的BA对麦冬茎尖丛生芽分化起着促进作用。添加了椰子汁的培养基效果明显好于对照组和添加香蕉泥的培养基。不同蔗糖浓度对短葶山麦冬丛生芽增殖的差异不大，蔗糖浓度的选择在20g/L时较佳。短葶山麦冬壮苗生根培养基选择1/2MS+IBA0.5mg/L时最佳，生根系数达到6.87。泥炭土为最佳的移栽基质，福州地区的移栽时间宜选择在4月份。 2短葶山麦冬茎尖愈伤组织的诱导及其植株再生 通过对不同的外植体(茎尖，块根，叶片，果实)进行诱导发现，茎尖愈伤组织的诱导率最高达到80％。短葶山麦冬茎尖愈伤组织诱导的培养基是MS+2，4-D2.0mg/L+BA0.1mg/L+NAA0.5mg/L和MS+2，4-D1.5 mg/L+BA1.0 mg/L+NAA1.0 mg/L，诱导率可以为87.5％。愈伤组织增殖培养基为MS+2，4-D0.5-1.0mg/L时，其增殖系数为6.53。通过比较选择蔗糖浓度在20g/L为佳，在生产成本考虑选择以自来水为水质进行愈伤组织培养。光培养和暗培养对短葶山麦冬愈伤组织保持的差别不大，以暗培养为主。短葶山麦冬愈伤组织在培养过程中其愈伤组织生长趋势呈“S”，在培养过程中，含水率变化总体呈下降趋势，增殖系数呈上升趋势。 愈伤组织转化的的培养基为未添加生长调节剂的空白培养基，不同蔗糖浓度下均能出现愈伤组织诱导诱导成体胚，蔗糖浓度在30g/L时为佳。胚性愈伤组织分化与再生植株上，选择MS+ BA2.0mg/L+IBA1.0 mg/L+NAA0.5 mg/L的培养基诱导分化率最高，达到92％。 3短葶山麦冬悬浮培养细胞系的建立与保持 短葶山麦冬茎尖诱导的愈伤组织为松散型颗粒状，接种量为0.45g达到最大增长量的时间短，四种碳源(蔗糖、葡萄糖、甘露醇和山梨醇)对短葶山麦冬悬浮细胞培养的影响差别不是很大，其中蔗糖的增殖率最高，达到252％，从成本上考虑，在以后的培养过程适合添加蔗糖作为碳源。短葶山麦冬悬浮细胞系的生长动态大致呈“S”形。短葶山麦冬悬浮细胞系培养选择的时间为10d。 4短葶山麦冬愈伤组织的多糖提取工艺优化研究及多糖动态变化研究 短葶山麦冬愈伤组织于60℃烘干箱至恒重，加石油醚，在65℃水浴锅中脱色30min，挥干溶剂，加12倍水提取2次，每次30min，加乙醇至浓度为90％。绘制标准曲线为y=215.78x+0.7977，R2=0.9964。取短葶山麦冬粗多糖样品溶液0.4mL置干燥试管中，加入5％苯酚溶液0.8mL，浓硫酸4.0mL摇匀，显色30min后，490nm处测定吸光值。愈伤组织中多糖的含量总体随着培养时间的增加，多糖含量也随着增加，在培养时间超过60d后，愈伤组织中多糖的含量趋近于稳定。短葶山麦冬愈伤组织在培养40d-60d后所得到的多糖含量较好，这个时候的愈伤组织生长量达到最高速率。通过组织培养所得到的短葶山麦冬块根中多糖的含量要高于在基地田间自然生长状态下的短葶山麦冬。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩写词

声明

第一章引 言

1药用花卉的组织培养研究进展

1.1药用花卉组织培养的优点

1.2药用花卉的快速繁殖

1.3药用花卉资源的离体保存

1.4药用花卉种质资源的体细胞胚胎发生和人工种子

1.5药用花卉的次生代谢物生产

1.6药用花卉的脱毒苗选育

2植物多糖提取工艺的研究进展

2.1水提醇沉法及其改进

2.2酶解辅助提取

2.3超临界CO2流体萃取

2.4超滤膜技术

2.5离子交换技术

3山麦冬研究进展

3.1 山麦冬生物学特性

3.2 山麦冬栽培要点

3.3 山麦冬组织培养

3.4药物学和药理作用

4本研究的内容和意义

4.1研究内容

4.2研究意义

第二章短葶山麦冬快速繁殖技术研究

第一节短葶山麦冬外植体无菌体系的建立及茎尖诱导分化

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

第二节短葶山麦冬丛生芽的继代与增殖

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

第三节短葶山麦冬试管苗的壮苗生根与炼苗

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

第三章短葶山麦冬茎尖愈伤组织的诱导及其植株再生

第一节短葶山麦冬愈伤组织的诱导

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

第二节短葶山麦冬愈伤组织的继代、增殖与保持

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

第三节短葶山麦冬愈伤组织的分化与体胚发生

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

第四章短葶山麦冬悬浮培养细胞系的建立与保持

1材料与方法

1.1材料

1.2方法

1.3培养条件

2结果与分析

2.1短葶山麦冬细胞培养体系的建立

2.2接种量的大小对悬浮细胞系生长的影响

2.3不同碳源对短葶山麦冬悬浮培养细胞培养的影响

2.4短葶山麦冬悬浮细胞系生长曲线绘制

3讨论

3.1短葶山麦冬悬浮细胞培养体系的建立和保持

3.2接种量的大小对生长的影响

3.3悬浮培养的利用

第五章短葶山麦冬愈伤组织的多糖提取工艺优化研究及多糖动态变化研究

第一节短葶山麦冬多糖提取工艺优化研究

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

第二节短葶山麦冬愈伤组织多糖的动态变化

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

第六章小结

参考文献

附录

在学期间发表论文和参加学术活动

致谢