马鞍藤产树脂糖甙内生真菌的筛选及发酵条件优化

摘要

马鞍藤是一种含有很多活性物质的固沙植物和药用植物，在环境绿化和医药方面有很好的利用价值。有很多研究通过化学方法从马鞍藤中提取出了许多有用的物质，其中树脂糖甙作为番薯属植物的特征化学成份，具有新颖的化学结构和多样的生物活性，为新化合物的合成和新药物的研制提供了很好的依据。本试验从马鞍藤中筛选出一株能产生树脂糖甙的内生真菌MJ8，鉴定出目标菌株并进行发酵条件的优化来提高树脂糖甙的产量。试验结果如下：
　　1）采用组织分离法，从马鞍藤的茎和叶中分离出内生真菌120株，然后通过摇瓶发酵对分离出的内生菌进行筛选，将发酵液通过柱层析和蒸馏后采用薄层色谱法与标准品对照。最终筛选出一株内生真菌MJ8可以产生树脂糖甙。
　　2）首先通过形态学方法，观察MJ8的菌落、菌丝和分生孢子形态，初步归类为拟盘多毛孢属真菌，然后运用分子生物学方法分析18S rDNA序列和ITS序列并构建系统发育树，结果表明MJ8可能为一株新的拟盘多毛孢属真菌。
　　3）首先通过单因素试验确定发酵的氮源、碳源和发酵时间，并确定PDB培养基内部各种物质的最佳条件，然后通过Plackett-Burman试验筛选出对试验结果有显著影响的4个因子乳糖、硫酸铵、温度和接种量，最后采用Box-Behnken试验进行响应面分析确定了发酵的最佳条件为乳糖浓度40.200g/L，硫酸铵浓度13.800g/L，温度31.8℃，接种量5％，硫酸亚铁浓度0.010g/L，氯化钾浓度2.000 g/L，硫酸镁浓度0.500 g/L，磷酸氢二钾2.000 g/L，发酵时间16d，转速120 rmp/min，此时得到产物的产量为0.405g/L，与优化前的0.138g/L相比提高了大约2倍。

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第一章 前言

1.1 马鞍藤简介

1.2 树酯糖甙研究进展

1.3 植物内生菌研究进展

1.4试验的目的和意义

第二章 马鞍藤内生真菌的分离及筛选

2.1 试验材料和试剂

2.2 试验方法

2.3 结果与分析

2.4 小结

第三章 目标菌株的鉴定

3.1 试验材料和方法

3.2 试验方法

3.3 结果与分析

3.4 小结

第四章 发酵条件优化

4.1 试验材料和方法

4.2 试验结果

4.3 小结

第五章 总结和展望

5.1 试验总结

5.2 展望

参考文献

致谢