蜂胶对感染根管消毒功效的实验和临床研究

摘要

背景：牙齿根尖周炎是由根管内微生物感染引起的。微生物因素在根尖周炎的发生、发展和持续存在中起着非常重要的作用。厌氧菌已被大多数学者公认为是牙髓、根尖周病的优势菌，约占其细菌总数的2/3以上。临床治疗中针对感染根管最常用的消毒方法是药物消毒。目前常用的根管消毒药物有甲醛甲酚(formcresol，FC)、樟脑苯酚(camphorated phenol，CP)和氢氧化钙(Ca(OH)2)等。近年来，国内外研究表明，FC、CP等都有较强的细胞毒性，作为半抗原可引起机体免疫损害，同时FC有较强的刺激性和致癌的可能性；氢氧化钙不能有效消除感染根管内的所有微生物，尤其对顽固性根尖周炎或根管治疗术失败后患牙中的病原菌。因此寻求一种消毒力强、副作用小的根管消毒药物一直是国内外学者所关注的研究课题。 近年来蜂胶用于口腔疾病的治疗已有相关报道。据文献报道蜂胶使用安全，对人体无毒、无刺激性、无致癌性，不产生耐药性等。尽管国内外学者对蜂胶做了大量研究，但是目前关于国产蜂胶用于根管消毒方面的基础及临床等相关研究报道还较少，所以本课题将对这些方向进行些研究。目的：本课题拟研究国产水溶性蜂胶对感染根管内常见菌：中间普氏菌、具核梭杆菌、中间普氏菌及具核梭杆菌的混合菌的抑菌活性；对人牙周膜成纤维细胞的细胞毒性。探讨蜂胶用于感染根管消毒的有效性和安全性，同时选择适宜浓度的蜂胶进行临床试验，获取临床疗效资料，为临床应用提供一定的理论依据。 材料与方法： 1.蜂胶对中间普氏菌、具核梭杆菌、中间普氏菌及具核梭杆菌的混合菌的体外抑菌实验。用BHI+Hemin液体培养基将蜂胶水溶液按对倍稀释原理，配成5种浓度的药液，依次加入BHI培养基中，制备成含药物琼脂平板，在厌氧条件下接种并培养中间普氏菌、具核梭杆菌及二者的混合菌48小时，检测琼脂平板上细菌的生长情况，无细菌生长的最低药物浓度为蜂胶对两单种菌及混合菌的最低杀菌浓度(MBC)。 2.蜂胶对人牙周膜成纤维细胞的细胞毒性作用。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法，以氢氧化钙为对照组，评价0.6％、0.4％、0.2％、0.1％的蜂胶水溶液对人牙周膜成纤维细胞相对增殖率的影响，并用五级毒性分类法评级。 3.采用完全随机对照的方法，选择慢性根尖周炎门诊患者72名，随机分为三组(两组为实验组，一组为对照组)。选择单根管前牙或双尖牙，常规根管预备后，实验组分别封入0.1％的蜂胶和0.4％的蜂胶，对照组封入氢氧化钙糊剂， 1周后复查。分别记录三组病例临床症状的改善情况及复诊次数；分别在根管预备前、根管预备后、封药后用纸尖取样并接种在BHI血琼脂培养基表面，厌氧罐培养48 h。观察培养基上细菌菌落的形态，选择培养基上的优势菌，依据Bergey’S细菌学鉴定手册，作革兰氏染色进行初步鉴定分类，并记录相应菌落数量。通过所得数据评价蜂胶用于感染根管消毒的临床效果。 结果： 1.蜂胶水溶液对中间普氏菌、具核梭杆菌及二者的混合菌均有良好的抑菌作用，其MBC分别为0.025％、0.05％和 0.05％，抑制作用随蜂胶浓度的升高而增强。 2.在不同浓度的蜂胶及氢氧化钙溶液的作用下，细胞相对增殖率均有改变，且浓度越高，细胞毒性越大，但其细胞毒性均在2级以下，属于轻微毒性。其中0.1％的蜂胶与1％的氢氧化钙细胞毒性最弱，与其他各浓度组间存在显著性差异(P＜0.05)。 3.0.1％蜂胶、0.4％蜂胶、氢氧化钙糊剂均能够有效改善根尖周炎患者临床症状，从疼痛、叩痛、红肿、窦道等的消除和缓解方面统计，单因素各组组间有显著性差异(P＜0.05)；组间两两比较无显著性差异(P＞0.05)。从封药次数上统计，0.4％蜂胶的改善效果好于其它两组，两组实验组之间有显著性差异(P＜0.05)，0.4％蜂胶和对照组之间有显著性差异(P＜0.05)，0.1％蜂胶和对照组之间无显著性差异(P＞0.05)。细菌取样培养结果显示0.1％蜂胶、0.4％蜂胶、氢氧化钙各组在根管预备前后及封药后根管内的细菌数量均有明显下降，对各组分别进行组间方差分析，组间差异均有显著性(P＜0.05)，组间两两比较没有显著性差异(P＞0.05)。 结论： 1.蜂胶水溶液对中间普氏菌、具核梭杆菌及二者的混合菌均有良好的抑菌作用，提示蜂胶对口腔厌氧菌良好的抑菌活性。 2.蜂胶与氢氧化钙均对人牙周膜成纤维细胞的毒性较小，其中0.1％的蜂胶与1％的氢氧化钙的毒性最弱。 3.0.1％蜂胶、0.4％蜂胶和氢氧化钙糊剂均能够有效改善根尖周炎患者的临床症状；通过细菌培养、涂片镜检显示能有效杀灭感染根管内的致病菌。统计结果提示使用0.4％蜂胶用于根管消毒，具有较好的临床疗效及可操作性。蜂胶具有更深入的研究价值。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英汉缩略语名词对照

声明

前言

第一部分蜂胶对感染根管消毒功效的实验研究

实验一蜂胶对中间普氏菌和具核梭杆菌的抑制菌实验

1材料和方法

2结果

3讨论

实验二蜂胶对人牙周膜成纤维细胞细胞毒性的实验研究

1材料和方法

2结果

3讨论

第二部分蜂胶对感染根管消毒功效的临床研究

实验三蜂胶对感染根管消毒功效的临床试验

1材料和方法

2结果

3讨论

全文小结

照片

参考文献

文献综述 四种常用根管消毒药物的研究进展

致谢

研究生期间发表论文一览表及学术交流情况