小鼠Allen’s脊髓损伤模型建立及脊髓损伤合并感染时锌指蛋白A20表达情况研究

摘要

随着工农业、建筑及交通事业的发展，脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)的发病率有逐渐增加的趋势。SCI所导致的功能损害(如截瘫)，不仅给患者造成巨大的身心痛苦，而且还给家庭和社会带来沉重的经济负担和社会问题。目前，SCI研究的进展相对缓慢，预后常难于估计，主要是SCI的病理生理机制非常复杂，对其认识不全。因而建立一个适宜的SCI模型，是进行SCI基础研究的前提。1911年，Allen报道了垂直打击脊髓建立SCI模型的方法，因这种方法更接近于人类SCI过程，临床相关性好，已广泛用于SCI的研究、治疗。现在，大鼠急性SCI打击模型运用较广泛，并为人类SCI的研究做出了巨大贡献。随着对SCI研究的深入，探索某一基因或细胞因子对SCI后的影响变得越来越重要。小鼠不仅成本低、好喂养，而且在基因研究方面比大鼠更具明显优势，其基因与人类有着高同源性，人类对小鼠遗传操作技术也较成熟，便于分析某一基因或细胞因子对SCI后的影响，因此我们建立小鼠急性SCI打击模型并对其进行评价。 锌指蛋白A20是近年在细胞内源性保护机制的研究中发现的一类新的蛋白质分子，脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)或肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)等刺激因素均可诱导内源性锌指蛋白.A20的快速表达，而A20通过终止LPS或TNF诱导的单核巨噬细胞系统核因子-кB(nuclear factor-kappaB，NF-кB)活化来限制继发性损伤反应是很关键的，对NF-кB的活化具有重要的负反馈调控作用，是防止体内炎症反应失控的重要的内源性调控蛋白。A20研究的兴起，为深入揭示机体内源性保护机制以及进一步抑制创伤感染及其并发症的发生、发展提供了一条新的途径。而SCI性截瘫并发感染时，在内毒素刺激作用下，脊髓组织内锌指蛋白A20的表达变化规律及其与神经元继发性损害的相互关系以及神经元内源性保护机制研究等一系列相关问题，需待进一步研究与探讨。 目的： 1、建立并评价不同力致伤的小鼠Allen’s脊髓损伤模型，为进一步研究脊髓损伤机制提供实验动物参考。 2、初步研究SCI合并感染时小鼠脊髓组织中锌指蛋白A20的表达规律及其对脊髓损伤病理改变的影响。 方法： 1、将153只小鼠随机分为假手术组(18只)和实验组(135只)，实验组按打击重量及高度分为A组(2g×2.5cm，45只)，B组(3g×2.5cm，45只)，C组(3g×5cm，45只)。假手术组只暴露脊髓，实验组显露脊髓后采用改良Allen法致伤。伤后行运动功能BMS评分、MEP电生理测定及病理切片HE染色。 2、选用健康昆明种小白鼠95只，雌雄不拘，体重18～22g，制作SCI及SCI合并感染模型。随机分为对照组、单纯SCI组、单纯内毒素组和SCI内毒素组。行病理组织学观察及BMS评分。 结果： 1、实验组打击后运动功能损伤明显，但后期都有不同程度恢复，A组2w后BMS评分与对照组无显著性差异(p＞0.05)；C组恢复最差，死亡率最高；B组死亡率低，恢复不完全。实验组在损伤后3d内均出现MEP-N1峰潜期延长，之后逐渐降低；A组1w后MEP已与对照组无显著差异(p＞0.05)；B、C组8w时MEP仍显著延长。不同组、不同观察时间点病理切片也有不同改变。 2、各时间点单纯SCI组、SCI内毒素组与单纯内毒素组BMS评分差异显著(p＜0.05)，5d、7d时SCI组、SCI内毒素组BMS评分存在显著性差异(p＜0.05)。对照组和单纯内毒素组脊髓均未见明显充血水肿，SCI组术后1d～3d血肿逐渐消退，SCI内毒素组术后5d仍见脊髓部分充血水肿，至7d才逐渐消退。对照组和单纯内毒素组均未见神经元细胞胞质锌指蛋白A20明显阳性表达，SCI组术后8h、12h、1d可见A20阳性表达；SCI内毒素组于手术后2h可见A20阳性表达，一直持续到术后3d。 结论： 1、致伤力为2g×2.5cm，3g×2.5cm，3g×5cm时，可复制出小鼠轻、中、重度急性SCI模型，该模型所致的脊髓损伤结果稳定可靠，为SCI的理论研究奠定了基础。 2、锌指蛋白A20作为一种参与体内炎症反应调控的内源性蛋白，在SCI及SCI合并感染时，脊髓组织中即可呈现出阳性表达，SCI合并感染时表达时间显著延长。A20是机体的一种重要的内源性抗炎保护效应机制，可能对于调控SCI感染时脊髓适度的炎症反应具有重要意义。

目录

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摘要

前言

第一部分小鼠Allen's脊髓损伤模型的建立及评价

1实验方法

2实验结果

3讨论

第二部分脊髓损伤合并感染时小鼠脊髓组织中锌指蛋白A20表达情况初步研究

1实验方法

2实验结果

3讨论

全文结论

参考文献

图 片

文献综述 脊髓损伤药物治疗的现状

致 谢

研究生期间撰写、发表论文情况