融合型自杀基因Fcy::Fur/5-FC对人卵巢癌细胞杀伤作用的研究

摘要

目的：研究融合型自杀基因Fcy：：Fur在真核细胞中的表达情况，并建立其在人卵巢癌细胞中的稳定表达的细胞株，研究融合型自杀基因Fcy：：Fur联合5-氟胞嘧啶（5-FC）对人卵巢癌细胞株（SKOV3）的杀伤作用，为研究融合型自杀基因Fcy：：Fur在肿瘤的基因治疗方面的应用奠定基础。 方法：（1）应用基因重组技术，将pORF-Fcy：：Fur.中的Fcy：：Fur目的基因亚克隆到荧光真核表达载体pEGFP-N1，以酶切和测序鉴定重组质粒的正确性。（2）应用脂质体介导的转染技术将该质粒导入SKOV3细胞，并筛选稳定表达细胞株，通过报告基因荧光蛋白的表达、RT-PCR和Western blot检测其融合蛋白在真核细胞中的表达；（3）5-FC作用于稳定表达融合型自杀基因Fcy：：Fur的SKOV3细胞株，以MTT法和FCM法检测5-FC对Fcy：：Fur转基因细胞的杀伤效应。 结果：（1）测序鉴定证明成功构建了重组质粒pEGFP-N1-Fcy：：Fur。（2）细胞转染24h后，60％转染细胞发出绿色荧光。（3）经G418筛选后，RT-PCR和Western-blot法检测到Fcy：：Fur表达。（4）在稳定表达融合型自杀基因Fcy：：Fur的SKOV3细胞株中加入5-FC后，MTT法检测到明显杀伤效应，FCM法检测到显著凋亡峰。 结论：融合型自杀基因Fcy：：Fur联合5-FC对人卵巢癌细胞SKOV3有明显的杀伤作用。且随5-FC浓度增加，抑制作用显著增强。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：符号说明

声明

前言

第一部分pEGFP-N1-Fcy::Fur真核表达质粒的构建与鉴定

1材料和方法

2实验结果

3讨论

第二部分重组质粒转染SKOV3细胞及Fcy::Fur稳定表达细胞株的筛选

1材料和方法

2结果

3讨论

第三部分融合型自杀基因Fcy::Fur/5-FC对人卵巢癌细胞杀伤作用

1材料和方法

2结果

3讨论

全文总结

参考文献

附 图

文献综述 卵巢癌靶向基因治疗研究进展

致 谢

攻读硕士学位期间发表的论文