渥曼青霉素联合丝裂霉素对人肝癌HepG-2细胞增殖和凋亡的影响

摘要

背景与目的：研究表明，P13K/Akt信号传导通路的异常激活与细胞恶性转化密切相关。本实验研究P13K激酶抑制剂Wortmannin联合丝裂霉素对肝癌HepG-2细胞增殖、凋亡及相关基因Cyclin D1、Bad表达的影响，并初步探讨其机制。
　　 方法：①不同药物浓度的渥曼青霉素、丝裂霉素单独及联合作用HepG-2细胞，四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖、生长状态。②分别加入终浓度为200 nmol/L渥曼青霉素、30nmol/L丝裂霉素单独及联合用药作用HepG-2细胞24h，Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞核形态学变化。⑨分别加入终浓度为200 nmol/L渥曼青霉素、30 nmol/L丝裂霉素单独及联合用药作用HepG-2细胞24h，流式细胞术检测肿瘤细胞增殖周期和凋亡率。④分别加入终浓度为200 nmol/L渥曼青霉素、30 nmol/L丝裂霉素单独及联合用药作用HepG-2细胞24h，逆转录聚合酶联反应及Western blot检测P13K/Akt信号传导通路相关基因和蛋白的表达。
　　 结果：①渥曼青霉素、丝裂霉素均可抑制肝癌细胞增殖，并呈量效与时效关系。24h单用渥曼青霉素、丝裂霉素的IC50分别是联合用药IC50的8.57倍及1.85倍。②渥曼青霉素、丝裂霉素单独及联合用药作用HepG-2细胞24h，流式细胞术检测结果显示，细胞分别主要被阻止于G0/G1期、G2/M期、G0/G1期。细胞凋亡率由处理前的（3.23±1.32）％分另0提高到（9.17±1.78）％，（9.00±2.01）％，（14.82±1.36）％（P（0.01）。③渥曼青霉素、丝裂霉素单独作用HepG-2细胞24h，荧光显微镜下观察，HepG-2细胞出现典型的凋亡形态学改变。联合用药后，细胞凋亡形态改变更加明显。④渥曼青霉素、丝裂霉素单独作用HepG-2细胞24h，细胞p-Akt活化程度降低，Cyclin D1表达量减少，Bad表达量增加（P<0.05）。联合用药后，p-Akt、Cyclin D1、Bad mRNA及蛋白表达水平改变更加明显（P<0.05）。
　　 结论：①渥曼青霉素、丝裂霉素均可抑制肝癌HepG-2细胞生长、增殖，联合用药后，抑制作用更加明显。②渥曼青霉素与丝裂霉素均可诱导肝癌HepG-2细胞凋亡，联合用药后，促凋亡作用更加明显。③Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平下调是渥曼青霉素与丝裂霉素抑制HepG-2细胞生长、增殖作用机制之一；Bad mRNA及蛋白表达水平上调是渥曼青霉素与丝裂霉素诱导HepG-2细胞凋亡作用机制之一。④渥曼青霉素与丝裂霉素可能是通过P13K/Akt信号通路抑制HepG-2细胞增殖，诱导其凋亡。