CD82/KAI1和CD9/MRP-1在神经胶质瘤细胞株中的表达及表达意义的初步研究

摘要

目的：胶质瘤是严重危害人类健康的疾病之一,是一种最常见的颅内原发恶性肿瘤。近年来,胶质瘤的发病率和死亡率在国内外均有明显增加,其恶性程度高者预后十分差。胶质瘤细胞本身超乎寻常的局部侵袭、转移能力是疾病治疗过程中所面临的巨大挑战。研究表明,通过对肿瘤转移抑制因子的检测可预判患者预后的情况,甚至可以为胶质瘤的基因治疗提供潜在靶点的理论依据。已有研究表明CD82/KAI1、CD9/MRP-1在众多实体性恶性肿瘤转移和增殖中发挥作用,为进一步研究CD82/KAI1、CD9/MRP-1在胶质瘤细胞发生迁移、增殖中的作用,本文以两种恶性程度存在差异的胶质瘤细胞株(CHG-5、U251)为研究对象,采用细胞培养、免疫细胞化学、PT-PCR等方法从mRNA和蛋白水平初步检测CD82/K-AI1、CD9/MRP-1的表达水平,探索其与胶质瘤细胞迁移力和增殖力的关系。
　　 方法：1.免疫细胞化学技术分别观察CHG-5、U251中CD82/KAI1、CD9/MRP-1的表达情况。2.RT-PCR分别观察CHG-5、U251中CD82/KAI1mRNA、CD9/MRP-1mRNA的表达情况。3.分别设立1:100、1:200CD82/KAI1抗体干预组和空白对照组,通过划痕试验于24h、48h观察CD82/KAI1对细胞迁移能力的影响并进行统计分析。4.分别设立1:100、1:200、1:400 CD9/MRP-1抗体干预组和空白对照组,通过流式细胞术于24h、48h观察CD9/MRP-1对细胞周期的影响并进行统计分析。
　　 结果：1.U251细胞组中CD82/KAI1及CD9/MRP-1的蛋白水平表达均高于CHG-5细胞组,差异有显著性(P<0.01)；2.U251细胞组中CD82/KAI1mRNA及CD9/MRP-1mRNA表达均高于CHG-5细胞组,差异有显著性(P<0.01)；3.U251细胞CD82/KAI1抗体干预组迁移细胞数量高于对照组(P<0.05),且迁移细胞数量随抗体浓度升高而增加(P<0.05)。4.CHG-5细胞CD9/MRP-1抗体干预组中细胞周期阻滞于G0/G1期,高于对照组(24h:P<0.05；48h:P<0.01),且比例随抗体浓度升高而增加(P<0.05)。5.U251细胞CD9/MRP-1抗体干预组中细胞周期阻滞于S期,高于对照组(24h:P<0.01；48h:P<0.01),且比例随抗体浓度升高而呈现上升趋势(P<0.05)。
　　 结论：CD82/KAI、CD9/MRP-1均在恶性胶质瘤细胞株中表达,且两者在U251细胞中表达较CHG-5细胞都高；CD82/KAI1可抑制胶质瘤U251细胞的迁移能力,CD9/MRP-1可抑制胶质瘤CHG-5细胞和U251细胞的增殖能力。推测CD82/KAI、CD9/MRP-1的检测能为胶质瘤临床治疗方案的选择和预后的评估提供一定依据。