S-腺苷酰-L-甲硫氨酸对肝癌细胞增殖及迁移能力的影响以及作用机制

摘要

目的：探讨作用不同浓度的S-腺苷酰-L-甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAMe)对肝癌细胞增殖,迁移等的影响。并在基因水平研究SAMe对于癌基因C-myc表达,以及C-myc蛋白分布的影响,为进一步深入研究SAMe在肝癌治疗中的作用奠定基础,从而也为肝癌治疗性药物的研究提供一个方向。
　　 方法：HepG2细胞进行体外培养,10组不同浓度(2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、17.5、20.0、22.5、25.01μmol/L)的SAMe分别作用于HepG2细胞,每24h用MTT法检测HepG2细胞的增殖情况影响,连续检测8天,并且从中筛选得出最短时间中SAMe作用的最佳药物半数抑制浓度(IC50)；用此浓度作用细胞,划痕实验检测SAMe对HepG2细胞迁移能力的影响；取对数生长期的HepG2细胞,分别采用RT-PCR,Western Blotting和免疫细胞化学的方法检测在其最佳药物半数抑制浓度(IC50)作用5d后,SAMe对于癌基因C-myc转录,C-myc蛋白亚细胞定位以及表达的影响。
　　 结果：10组不同浓度的SAMe分别作用HepG2细胞,连续检测8d,每24h检测一次,通过检测所得结果计算得出其作用的IC50分别为24.1μmol/L、22.5μmol/L、19.3μmol/L、17.1μmol/L、15.2μmol/L、14.2μmol/L、12.8μmol/L、μmol/L,并且SAMe的抑制作用有时间和剂量的双重依赖性,最后根据相关参考文献确定得出,终浓度为15.2μmol/L的SAMe处理细胞5d,为其最短时间中的最佳药物半数抑制浓度(IC50)；在最佳药物半数抑制浓度(IC50)为15.2μmol/L的SAMe处理HepG2细胞5d后,细胞的迁移能力也受到影响,划痕后细胞愈合率仅为未处理组的76.78％,差异具有统计学意义(P=0.04*:P<0.05)；另外,在应用最佳药物半数抑制浓度(IC50)为15.2μmol/L的SAMe处理HepG2细胞5d后,RT-PCR.检测结果显示HepG2细胞中癌基因C-myc的mRNA水平的表达明显降低,SAMe处理组仅为未处理组的58.3％(P=0.012*:P<0.05):Western Blotting检测也显示SAMe处理组C-myc蛋白的表达减少,为未处理组的52.6％(P=0.0017*:P<0.05)；然而,免疫细胞化学检测结果显示,C-myc在HepaG2细胞中表达定位于胞浆,并且在SAMe处理组与未处理组之间,定位没有发生变化。
　　 结论：⑴SAMe可以抑制HepaG2细胞的增殖和迁移,并且其对肝癌细胞的增殖的抑制作用有着时间和剂量的双重依赖性。⑵SAMe对于癌基因C-myc的转录,蛋白的表达都有一个较为明显的抑制作用,但是对于癌基因C-myc在肝癌细胞中的定位没有显著影响。综上,通过应用SAMe作用HepG2细胞后,对肝癌细胞增殖和迁移能力,以及对癌基因C-myc的影响的检测,为肝癌治疗性药物的研究提供一个方向。