血管内皮生长因子受体3和神经纤毛蛋白2的反义寡核苷酸对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

摘要

目的：
　　探讨并比较分别阻断和联合阻断血管内皮生长因子受体3及神经纤毛蛋白2基因的表达对胃癌细胞株SGC-7901增殖和凋亡的影响。
　　方法：
　　(1)将SGC-7901细胞分为三组，VEGFR3阻断组(V组)、NRP2阻断组(N组)和VEGFR+NRP2阻断组(T组)，各组中又包含空白对照组，脂质体转染组，800 nmol/L无义链转染组(Nonsense Oligodeoxynucleotide，NSODN)和200 nmol/L、400 nmol/L、800 nmol/L反义链转染组(Antisense Oligodeoxynucleotide，ASODN)。
　　(2)采用Lipofectamine TM 2000分别将硫代硫酸化修饰的VEGFR3-ASODN、NRP2-ASODN及联合VEGFR3-NSODN+NRP2-NSODN转染人胃癌SGC-7901细胞；用荧光显微镜观察细胞的转染情况。
　　(3)RT-PCR法检测各组细胞中VEGFR3-mRNA、NRP2-mRNA的表达水平。
　　(4)MTT法和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡情况。
　　(5)将本实验所得数据与本课题组其他成员在同期试验中关于NRP1-ASODN和VEGFR2-ASODN对SGC7901细胞的增殖和凋亡作用研究所得的数据进行分析比较。
　　结果：
　　(1)转染24 h后，将各组转染细胞置于荧光显微镜下观察，可见空白对照组和脂质体转染组均无荧光表达，无义链转染组和反义链转染组的胃癌细胞于胞浆位置均可见明显的绿色荧光。
　　(2)V组中转染VEGFR3-ASODN的细胞VEGFR3基因mRNA转录水平显著低于空白对照组、脂质体转染组和VEGFR3-NSODN转染组(P均<0.05)；N组中转染NRP2-ASODN的细胞NRP2基因mRNA转录水平显著低于空白对照组、脂质体转染组和NRP2-NSODN转染组(P均<0.05)；V组和N组组间比较，空白对照组，脂质体转染组和无义链转染组差异均无统计学意义(F=0.32，P=0.5760)。
　　(3)MTT检测结果显示，在相同转染浓度下，VEGFR3-ASODN对SGC-7901细胞增殖抑制率显著高于较NRP2-ASODN；联合转染VEGFR3-ASODN+NRP2-ASODN对细胞增殖抑制率显著高于单独转染组(P<0.05)。
　　(4)流式细胞术检测结果显示，转染VEGFR3-ASODN组细胞的凋亡率显著高于NRP2-ASODN组，联合转染VEGFR3-ASODN+NRP2-ASODN组的细胞凋亡率显著高于单独转染组，差异均有统计学意义(P<0.001)。
　　(5)相同转染浓度下，NRP2-ASODN转染组细胞的增殖抑制率及凋亡率均高于NRP1-ASODN转染组；与VEGFR2-ASODN转染组比较，VEGFR3-ASODN转染组细胞的增殖抑制率差异无统计意义(P>0.05)，凋亡率显著降低(P<0.05)；与VEGFR2-ASODN+NRP1-ASODN联合转染组比较，VEGFR3-ASODN+NRP2-ASODN联合转染组细胞增殖抑制率无显著差异(P>0.05)，凋亡率显著降低(P<0.05)。
　　结论：
　　(1)VEGFR3-ASODN和NRP2-ASODN都可抑制SGC-7901细胞增殖，促进细胞凋亡。
　　(2)VEGFR3-ASODN对SGC-7901细胞增殖抑制作用及促凋亡作用强于NRP2-ASODN，且联合转染时，对细胞增殖抑制作用和促凋亡作用都增强，推测VEGFR3及NRP2在细胞增殖及凋亡中起协同作用。
　　(3)NRP1-ASODN对SGC-7901细胞增殖抑制作用及促凋亡作用强于NRP2-ASODN。VEGFR2-ASODN与VEGFR3-ASODN对细胞增殖抑制作用强度无明显差异，但后者的促凋亡作用强于前者。联合转染VEGFR3-ASODN+NRP2-ASODN对细胞增殖抑制作用强度与联合转染VEGFR2-ASODN+NRP2-ASODN无明显差异，但前者的促凋亡作用弱于后者。