丹参酮ⅡA对急性期川崎病患儿外周血单个核细胞NF-κB活化及TNF-α、IL-1β、IL-8表达影响的研究

摘要

目的：探讨不同浓度丹参酮Ⅱ A(TanshinoneⅡA，TanⅡ A)对急性期川崎病(Kawasaki disease，KD)患儿外周血单个核细胞(peripheralblood mononuclear cells，PBMCs)中核转录因子-κB(NF-κappaB，NF-κB)活化及肿瘤坏死因子-Ⅱ(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、白细胞介素-8(intedeukin-8，IL-8)表达的影响。同时探讨川崎病的发病机制、了解TanⅡ A的抗炎作用效果，并与传统药物阿司匹林的作用效果进行比较。
　　方法：KD组以及同期门诊健康体检儿童(Control组)各20例，采用Ficoll密度梯度离心法分离提取受试对象外周静脉血中的PBMCs，并将每例进行分组培养，即空白组、12-肉豆蔻酰-13乙酸佛波酯(PMA)组、PMA+不同浓度TanⅡ A组(TanⅡ A终浓度分别为1mg/l，3mg/l，10mg/l)、PMA+ASA组，采用免疫细胞化学法观察培养后各组细胞中NF-κB的活化率，通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组培养上清液中TNF-α、IL-1β、IL-8的表达量。
　　结果：自然培养、PMA刺激培养及PMA+不同浓度TanⅡ A培养(TanⅡ A终浓度分别为1mg/l、3mg/l、10mg/l)和PMA+ASA培养条件下，KD组各组NF-κB活化率和TNF-α、IL-1β、IL-8的表达量均显著高于其相应的健康对照组(p均=0.000)。加入PMA培养后，KD组和健康对照组NF-κ3活化率均明显高于其空白组(p<0.01，p<0.05)，两组培养上清中TNF-α、IL-1β和IL-8的表达量均明显高于其空白组(p均<0.01)。加入PMA+终浓度为1mg/l的TanⅡ A培养后，两组NF-κB活化率和TNF-α、IL-1β和IL-8的表达量均较其PMA组无显著差异(p均>0.05)；加入PMA+终浓度为3mg/l的TanⅡ A培养后，两组NF-κB活化率较其PMA组明显下降(p<0.01，p<0.05)，两组培养上清中IL-1β、IL-8的表达量和KD组培养上清中TNF-α的表达量均显著下降(p均<0.01)，而健康对照组培养上清中TNF-α的表达量无明显下降(p>0.05)；加入PMA+终浓度为10mg/l的TanⅡ A培养后，两组NF-κB活化率较其PMA组明显下降(p<0.01，p<0.05)，其培养上清中TNF-α、IL-1β和IL-8的表达量也明显下降(p均<0.01)，且较PMA+终浓度为3mg/l的TanⅡ A组下降更明显。加入PMA+ASA培养后，二组中NF-κ3活化率和TNF-α、IL-1β、IL-8的表达量较PMA组显著降低，且PMA+ASA组较其PMA+终浓度为10mg/l的TanⅡ A组降低更明显。NF-κB的活化率与TNF-α、IL-1β、IL-8的表达量均呈正直线相关关系(r=0.817，p<0.01；r=0.665，p<0.05；r=0.782，p<0.01)。
　　结论：①急性期KD患儿PBMCs中NF-κB活化增强及TNF-α、IL-1β、IL-8表达量增加，可能参与了急性期KD免疫血管炎性反应，可能介导了急性期KD免疫血管损伤；②TanⅡ A在急性期KD患儿PBMCs中的抗炎作用具有剂量依赖性，其抗炎作用机制可能与阿司匹林相同，即通过抑制核转录因子NF-κB的活化，进而抑制其下游TNF-α、IL-1β、IL-8的表达而实现。