乙肝病毒X蛋白及其截短体与损伤DNA结合蛋白1在HBV复制中的作用

摘要

背景：乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein，HBx)与损伤DNA结合蛋白1(damage-specific DNA binding protein1，DDB1)在乙肝病毒(Hepatitis B virus，HBV)复制中发挥了重要作用。HBV基因组整合到宿主基因组过程中，HBx蛋白常常发生断裂不全，转录为HBx蛋白的截短体，既往多项研究表明HBx蛋白截短体对HBV的复制产生了一定的影响，并且不同截短长度、不同截短部位的截短体对HBV的复制产生的影响也不同。但是，HBx蛋白截短体是否通过影响DDB1水平来影响HBV复制至今尚无详细报道。
　　目的：我们的研究将进一步探讨HBx蛋白及其两个截短体(HBx1-101，HBx43-154)与DDB1在HBV复制中的作用。
　　方法：使用质粒瞬时转染HepG2细胞后，分别提取转染后72h细胞总RNA和细胞总蛋白，通过逆转录实时定量PCR和Western blot分析方法分别在DDB1基因的mRNA和蛋白水平观察HBx蛋白及其截短体对DDB1蛋白的影响。并通过质粒共转染瞬时转染HepG2细胞后，提取转染72h后各转染组细胞胞浆DNA，收集各转染组细胞的培养上清液，通过实时定量PCR及ELISA方法检测各组细胞HBV复制及病毒标志物表达水平，从而观察HBx蛋白及其两个截短体与DDB1对HBV复制的影响。
　　结果：在有HBV复制的HepG2细胞中，转染了HBx C-端截短体HBx1-101的细胞中DDB1蛋白的表达水平明显下降，且不能使缺失HBx蛋白的HepG2细胞中HBV的复制及病毒标志物表达恢复到野生型水平；而转染N-端截短体HBx43-154的细胞中DDB1蛋白表达水平与转染HBx的对照组相比无明显变化，且能使缺失HBx蛋白的HepG2细胞中HBV的复制及病毒标志物表达恢复到野生型水平。并且各转染组DDB1蛋白水平变化与HBV复制水平相平行，即DDB1蛋白水平的降低，使得HBV复制水平也相应降低。
　　结论：C-端53个氨基酸及DDB1蛋白对于HBV野生型水平的复制是必需的，而N-端42个氨基酸对于HBV复制水平无明显影响。C-端53个氨基酸对HBV复制的影响作用可能是通过影响DDB1蛋白水平实现的。