在肝癌细胞中乙型肝炎病毒X蛋白通过转录因子NF-Y上调AKR1C1基因的表达

摘要

目的：
　　探索HBx蛋白上调AKR1C1表达的机制及AKR1C1在HBV诱导的肝癌发生过程中的作用，为HCC的治疗提供新的思路。
　　方法；
　　1.用RT-PCR的方法在HepG2细胞与HepG2.2.15细胞中检测AKR1C1 mRNA的表达差异。在Ad-HBx感染的HepG2细胞中以及在HepG2.2.15细胞中干扰HBx后检测AKR1C1的mRNA水平。
　　2.构建AKR1C1的5'启动子及区段全长荧光素酶报告质粒，在HepG2和HepG2.2.15细胞中，检测各AKR1C1启动子克隆的相对荧光素酶活性。
　　3.构建HBx作用于AKR1C1的可能区段的截短突变克隆，检测截短克隆的相对荧光素酶活性。
　　4.通过重叠PCR和反向PCR的方法构建转录因子结合位点突变克隆。将原始克隆及突变克隆与HBx的表达质粒共转染HepG2细胞，利用双荧光素酶报告基因检测系统，检测荧光素酶活性。
　　结果:
　　1.RT-PCR结果显示HepG2.2.15细胞中AKR1C1的表达量明显高于HepG2细胞。Ad-HBx感染HepG2细胞后，AKR1C1的表达量明显增加。HepG2.2.15细胞抑制HBx后，AKR1C1的mRNA水平下降。
　　2.构建了AKR1C1启动子荧光素酶报告质粒，且与pCMV-sport6-HBx共转染时，相对于对照组(pCMV-sport6)，其相对荧光素酶活性明显增加。
　　3.构建了AKR1C1启动子截短荧光素酶报告质粒。将截短质粒，pCMV-sport6-HBx，pRL-TK共转染入HepG2细胞以及将截短质粒，pRL-TK共转染HepG2.2.15细胞，确认了-128/-88区段为HBx诱导AKR1C1启动子活性增加的关键区段。
　　4.在AKR1C1启动子上对-128/-88区段上的转录因子的结合位点进行突变，获得突变质粒，证明核因子-Y(NF-Y)在HBx诱导AKR1C1表达增加的过程中起重要的作用。
　　结论:
　　在HepG2.2.15细胞中，HBx蛋白增强了AKR1C1的启动子活性，进而上调了AKR1C1的表达，这一过程是有转录因子NF-Y参与的。本研究探讨了HBx对AKR1C1表达的调节机制，为理解HBV诱导的HCC过程提供了新的思路。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

参考文献

第一部分 HBx对AKR1C1转录水平表达差异的验证

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

第二部分 HBx对AKR1C1启动子活性的影响

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

第三部分 HBx对AKR1C1启动子作用的区段分析

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

第四部分 HBx通过转录因子NF-Y上调AKR1C1的启动子活性

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

全文总结

参考文献

综述 乙型肝炎病毒X蛋白在肝细胞肝癌中的发病机制

致谢

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