急性期川崎病单核细胞活化型和抑制型FcγR表达初探

摘要

目的:
　　通过观察急性期川崎病(KD)患儿静脉注射丙种球蛋白(IVIG))治疗前后外周血单核细胞(MC)活化型和抑制型FcγR表达变化，探讨FcγR活化型/抑制型(A/I)表达失衡与KD炎症细胞因子过表达的关系，进一步阐明KD免疫发病机制
　　方法:
　　收取2011年10月至2012年5月在我院住院治疗诊断为急性KD患儿25例，予IVIG治疗前后分别采血。根据患儿是否有冠状动脉损伤分为冠脉损伤组（KD-CAL+，12例）和无冠脉损伤组(KD-CAL-，13例)。同年龄健康儿童15例。
　　①流式细胞术检测外周血MC FcγRⅠ和FcγRⅢ表达水平;
　　②反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及荧光定量PCR检测MCFcγRⅡa、FcγRⅡb、炎症细胞因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）、趋化因子(IP-10、RANTES、iNOS) mRNA表达;
　　③酶联免疫吸附(ELISA)法检测血浆IFN-γ和TNF-α浓度。
　　结果:
　　①急性期KD患儿MC FcγRⅠ表达无明显变化;FcγRⅢ表达升高，IVIG治疗后下降:经流式细胞术检测MC细胞表面FcγRⅢ表达，注意到未经任何丝裂原刺激的急性期KD患儿CD19+细胞FcγRⅢ阳性百分率(％)和平均荧光强度(MFI)明显高于同年龄对照组[％:(29.84±14.77)％vs.(17.61±5.15)％,t=3.78, P＜0.05; MFI:459±254 vs.308±148，t=2.38，P＜0.05]，IVIG治疗后FcγRⅢ MFI和阳性百分率明显下降，基本达到同龄对照组水平;FcγRⅠ表达与对照组相比无明显差异(P＞0.05)。
　　②FcγRⅡa升高，IVIG治疗后降低;FcγRⅡb降低，IVIG治疗后升高:经Real-time PCR检测MC FcγRⅡa和FcγRⅡb表达，观察到急性期KD患儿MC FcγRⅡa mRNA明显高于同龄对照组[(1.53±0.68)vs.(0.85±0.33)，t=4.24，P＜0.05]，KD-CAL+FcγRⅡa表达高于KD-CAL[(2.11±0.54) vs.(1.07±0.25),t=5.91, P＜0.05];急性期KD患儿MC FcγRⅡb mRNA较同龄对照组明显降低[(5.74±3.45) E-03 vs.(1.77±0.76) E-02,t=3.62, P＜0.05], KD-CAL+FcγRⅡb表达明显低于KD-CAL[(2.74±1.29)E-03 vs.(8.10±2.65)E-03，t=6.63，P＜0.05];IVIG治疗后，较同龄对照组，FcγRⅡa明显降低[(0.84±0.32)vs.(1.53±0.68)，t=4.59，P＜0.05];FcγRⅡb明显增高[(1.40±0.67) E-02 vs.(1.77±0.56)E-02,t=5.71,P＜0.05]。
　　③细胞因子升高，IVIG治疗后降低:经Real-time PCR检测急性期KD患儿MC炎症细胞因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）/趋化因子(IP-10、RANTES、iNOS)明显高于同龄对照组（P＜0.05），IVIG治疗后有不同程度降低;IVIG治疗前IL-6、TNF-α和IP10与FcγRⅡa表达呈正相关（r=0.73,0.91,0.61,P＜0.05）。
　　④FcγRⅡb表达影响因素检测:探讨影响急性期KD患儿FcγRⅡa和FcγRⅡb表达调节因素，本文采用ELISA检测血浆IFN-γ和TNF-α浓度，注意到急性期KD患儿IFN-γ和TNF-α血浆浓度明显高于健康对照组(IFN-γ:24.91±6.65 vs.15.15±2.6,t=6.53,P＜0.05; TNF-α:58.95±14.95 vs.42.35±6.41,t=4.86,P＜0.05),IVIG治疗后下降(IFN-γ:13.48±6.47 vs.24.91±6.65,t=2.02,P＜0.05; TNF-α:44.90±24.01 vs.58.95±14.95，t=2.48，P＜0.05)，相关性分析发现IVIG治疗前IFN-γ浓度与MC FcγRⅡa和FcγRⅢ表达呈正相关(FcγRⅡa:r=0.79,P＜0.05; FcγRⅢ:r=0.65,P＜0.05),TNF-α浓度与MC FcγRⅡb表达呈负相关（FcγRⅡb: r=-0.90，P＜0.05）。
　　结论:
　　急性期KD患儿FcγRⅡa、FcγRⅢ表达异常增高，FcγRⅡb表达降低，FcγR活化(A)/抑制(Ⅰ)表达失衡可能是导致MC异常活化，炎症细胞因子过表达的原因之一;IFN-γ、 TNF-α等细胞因子参与调控FcγR A/I平衡，IFN-γ和TNF-α等细胞因子异常表达可能与急性期KD患儿FcγR A/I失衡有关;IVIG治疗可能通过降低IFN-γ、TNF-α等炎症细胞因子血浓度，改善急性期KD患儿外周血细胞因子微环境，间接促进FcγR A/I向抑制型FcγR漂移，抑制MC异常活化，从而抑制急性期KD炎症反应。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

1．对象与方法

1．1 研究对象

1．2 研究内容

1．3 实验材料

1．4 主要仪器

1．5 实验方法

1．6 统计学分析

2．结果

2．1 急性KD患儿临床资料及实验室检查结果

2．2 急性期KD患儿MC FcγRⅠ和FcγRⅢ表达变化

2．3 急性期KD患儿MC FcγRⅡa和FcγRⅡb mRNA表达变化

2．4 Real-time PCR检测KD患儿CD19+MC炎症细胞因子和趋化因子mRNA表达

2．5 急性期KD患儿血浆IFN-γ和TNF-α浓度变化

3．讨论

4．小结

全文总结

参考文献

文献综述 FcγR调节免疫反应

致谢

攻读硕士期间研究成果及发表文章目录