shRNA抑制高尔基体α-甘露糖苷酶II基因的表达对胃癌细胞的侵袭力的影响及机制

摘要

目的:
　　初步研究分析，在中、低两种分化人胃癌细胞系中，高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(GMⅡ)各自的差异表达，以探讨GMⅡ在胃癌发生发展中的作用。
　　方法:
　　1.应用阳离子脂质体技术手法，将合成的GMⅡ靶向基因pGPU6/GFP/Neo-GMⅡ编号1406，分别同时转染至低分化胃癌细胞MGC-803和中分化胃癌细胞SGC-7901中，并借助荧光倒置显微镜观察荧光显示并计算转染率，最后经过G418筛选出稳定转染的细胞株。
　　2.利用Western-blot和RT-PCR检测转染以后两株细胞中GMⅡ和E-cadherin、α-catenin蛋白及mRNA表达变化情况。
　　3.同时利用体外细胞划痕试验和Transwell细胞小室侵袭实验来测定并比较GMⅡ被靶向沉默后，不同分化细胞及其对照组的侵袭能力。
　　结果:
　　GMⅡ shRNA转染后胃癌MGC-803和SGC-7901细胞的GMⅡ的蛋白和mRNA表达明显抑制，E-cadherin和α-catenin的蛋白表达明显升高(P＜0.05);细胞划痕实验结果显示，GMⅡ shRNA质粒转染组与其相应对照组比较，沉默GMⅡ后两种分化的胃癌细胞侵袭力都有所下降(P＜0.05)，Transwell细胞小室侵袭实验:GMⅡ shRNA组胃癌细胞较空白对照组，阴性对照组(shNC)细胞侵袭能力都明显降低，18h穿过Transwell的细胞数分别为:（65±5），（197±6），（186±5）;（72±4），（178±4），（184±5）与各自对照组比较，差别具有统计学意义(P＜0.05);
　　结论:
　　GMⅡ基因沉默后的不同分化胃癌细胞的侵袭能力下降，可能与上调E-cadherin、α-catenin的表达相关。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

1 材料和方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果

2．1 检测转染细胞株内荧光表达及其转染率

2．2 Western-blot检测shRNA抑制GMⅡ后胃癌细胞IGMⅡ、E-cadherin和α-catenin蛋白的表达

2．3 RT-PCR检测shRNA抑制GMⅡ后胃癌细胞GMⅡ、E-cadherin和α-catenin蛋白的mRNA表达

2．4 细胞划痕实验结果分析

2．4 细胞侵袭实验结果分析

3 讨论

全文小结

参考文献

综述 肿瘤微循环、E-cadherin／catenins与肿瘤

致谢

攻读硕士期间发表的学术论文